论文摘要
第一部分匹罗卡品诱发大鼠癫痫持续状态后海马结构可塑性变化的动态观察目的研究匹罗卡品颞叶癫痫模型大鼠行为学、电生理及神经可塑性变化,进一步探讨癫痫反复发作的病理基础。方法成年雄性SD大鼠,腹腔注射匹罗卡品诱发大鼠出现癫痫持续状态（status epilepticus,SE）,SE持续3h后注射地西泮终止发作。其后每天观察记录大鼠有无自发性痫性发作（spontaneous recurrent seizures,SRS）,于致痫后3h、7d和45d分别对大鼠进行EEG描记,并将大鼠在各时间点断头取脑,用HE、Nissl和Timm染色观察大鼠海马病理学改变,并用BrdU标记新生神经元,利用免疫荧光三标观察其与NeuN或GFAP的共表达情况。结果匹罗卡品致痫大鼠SE的诱发率为87%;EEG在急性期表现为丛集性棘波放电,潜伏期EEG正常,慢性痫性发作期可见癫痫样放电;HE、Nissl及Timm染色可观察到大鼠海马神经元损伤、星形胶质细胞增生和苔藓纤维出芽（mossyfiber sprouting,MFS）;BrdU+NeuN+GFAP三标免疫荧光染色显示,匹罗卡品致痫后齿状回新生神经细胞数增多,并随时间发展出现异位迁移,可出现在内分子层和门区,最终分化为神经元和胶质细胞。结论匹罗卡品致痫后根据大鼠行为学和EEG改变可分为急性期、静息期和慢性期,可造成海马神经元损伤、星形胶质细胞增生、苔藓纤维出芽和神经发生增加等可塑性改变,这些病理改变可能与自发性癫痫的发复发作有关。第二部分2R,4R-APDC对匹罗卡品诱发大鼠癫痫持续状态后海马神经发生的影响目的利用BrdU标记处于分裂期的细胞以观察Ⅱ组mGluR激动剂2R,4R-4-aminopyrrolidine-2,4-dicarboxylate（2R,4R-APDC）对匹罗卡品诱发成年SD大鼠癫痫持续状态后海马齿状回神经发生的影响。方法成年SD大鼠侧脑室内注射2R,4R-APDC或生理盐水1小时后,腹腔注射匹罗卡品诱发癫痫持续状态（status epilepticus,SE）,观察大鼠行为学改变,在处死前一天注射BrdU以标记新生细胞,取海马切片做BrdU单标免疫组化染色计数新生细胞;做BrdU与NeuN和GFAP的免疫荧光双标染色,利用激光共聚焦技术检测细胞增殖情况并鉴定细胞类型。结果经2R,4R-APDC预处理的大鼠可延长SE发生的潜伏期,并显著降低SE的发生,对致痫后的行为学改变有明显的改善作用;可显著减少致痫大鼠海马齿状回新生细胞数量,其中SGZ/GCL区域的新生细胞数量由1457.71±283.14减少为709.33±62.61（p＜0.05）,而门区的数量则由242.71±减少为140.67（p＜0.01）。但2R,4R-APDC对各组间新生细胞分化为神经元和星形胶质细胞的转化率无影响。结论2R,4R-APDC有显著的抗癫痫作用并且可以抑制SE后的神经发生,更重要的是可以抑制新生细胞的异位迁移,从而影响SE后海马结构的可塑性重建,抑制癫痫的发作。但2R,4R-APDC对新生细胞的分化倾向无明显影响,绝大多数分化为神经元,少数分化为星形胶质细胞。第三部分2R,4R-APDC对匹罗卡品致痫大鼠学习和记忆功能的影响目的研究选择性Ⅱ组mGluRs激动剂2R,4R-APDC对成年SD大鼠匹罗卡品致痫后学习、记忆功能的影响。方法复制匹罗卡品大鼠模型,随机分为4组:A组（APDC+EP）;B组（NS+EP）;C组（APDC）;D组（NS）分别脑室内注射2R,4R-APDC和生理盐水,24h后开始进行行为学观察,并进行抬高迷宫实验（elevated plus maze test）记录5min内大鼠在开放臂中逃避的时间及进入的次数。进行Morris水迷宫实验（morris watermaze test）,分别做定位航行试验记录逃避潜伏期;空间探索试验测其在120秒内跨过直径为10cm的原平台所在位置的次数、在原平台象限搜索时间占总时间（120s）的百分比及搜寻策略。结果本实验结果显示,致痫后可引发实验动物活动习性的改变,表现为警觉水平、恐惧、焦虑等防护性情感反应下降及空间学习和记忆能力受损。应用2R,4R-APDC后,致痫大鼠的恐惧、焦虑明显减轻,虽有轻度嗜睡等中枢抑制作用,但持续时间短,多在用药1周后消失;2R,4R-APDC可以显著改善情感反应,使进入开放臂的时间和次数明显减少（P＜0.05）;致痫后大鼠的逃避潜伏期延长,记忆站台所在位置的能力明显下降并可以使大鼠的搜寻策略变差,学习能力下降。脑室内注射2R,4R-APDC可使致痫大鼠的逃避潜伏期明显缩短（P＜0.01）,空间记忆能力和搜寻策略明显改善（P＜0.05）。结论脑室内注射2R,4R-APDC可以减轻致痫大鼠的恐惧、焦虑等情感反应,明显改善癫痫大鼠的学习和记忆能力。以mGluRs为作用靶点,消除Glu能通路障碍,可能成为防治癫痫后神经元损伤和认知功能障碍的一种新的药物治疗策略。