论文摘要
弓形虫是一种专性细胞内寄生的原虫,可以感染多种哺乳动物。人类感染主要通过未煮熟的或生的含有速殖子或缓殖子的肉（如猪肉,羊肉）,或者通过食物、水,以及未洗的由猫排泄的包囊污染的蔬菜。怀孕前妇女感染弓形虫通常不会遗传给胎儿;然而,如果感染发生在怀孕期间,病原体可传播给胎儿。在胎儿和新生儿中弓形虫病以各种不同形式出现,例如脑积水,脉络膜视网膜炎,颅内钙化,肝脾肿大,血小板减少,头小畸形,抽搐,发热等。然而,大多数新生儿的感染在出生时是没有症状的。先天性弓形虫感染的风险在早期妊娠要比晚期妊娠低,但先天感染的严重性更高,在怀孕期间获得的感染对胎儿会产生严重的后果。因此,弓形虫病是一个主要的公共健康问题。MIC10属于微线体蛋白家族并且由弓形虫速殖子微线体细胞器分泌。成熟的MIC10,其作用未知,是一18KDa蛋白,在速殖子要比缓殖子优先表达并且由虫体优先释放。与其他微线体蛋白不同,MIC10缺乏跨膜域,可以绑定宿主细胞受体,因此MIC10能够从组织中的感染部位扩散并且很容易成为循环抗原。本研究经过体外培养弓形虫得到弓形虫虫体后,提取弓形虫DNA。将弓形虫DNA作为模板,进行PCR扩增,得到MIC10A,MIC10B和MIC10C三段序列。经过克隆、表达、纯化,得到重组蛋白MIC10A-His、MIC10B-His和MIC10C-His。利用重组蛋白MIC10A-His和MIC10B-His免疫新西兰大耳兔,制备多克隆抗体。通过常规的纯化方法,即亲和层析法纯化抗血清,得到多克隆抗体。将兔抗MIC10A作为包被抗体,生物素标记的兔抗MIC10B作为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法检测弓形虫循环抗原MIC10C,初步得到了具有一定特异性和敏感性的检测方法。