论文题目: 精子因素对精子载体法制备转基因山羊影响的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 细胞生物学
作者: 赵永聚
导师: 魏泓
关键词: 精子供体,精液冷冻,人工授精,精子介导基因转移,山羊
文献来源: 第三军医大学
发表年度: 2005
论文摘要: 精子具有主动结合、转运、整合外源DNA的能力,并在受精时导入卵母细胞,获得转基因动物。精子介导基因转移（Sperm-mediated gene transfer, SMGT）是目前获得转基因动物简单而高效的方法之一。精子与外源DNA的整合是受到严格调控的一种现象,SMGT方法存在着极大的随机性和不确定性。SMGT方法主要是由外源DNA、精子、转染方法等构成的一个有机整体。但目前研究集中在外源DNA因素,如DNA浓度、片段大小、序列、结构、载体类型等对SMGT方法的影响。SMGT方法离不开精子。精液来源、精液品质、精浆、精子质膜和精液处理方法等构成了SMGT方法的精子因素。但这些精子因素对SMGT方法的影响如何,目前研究还不系统。从这些精子因素出发,筛选精子供体、优化精液处理方法,对提高精子转染外源DNA效率,建立稳定、高效的SMGT方法,提高生产转基因动物效率,也是十分重要的。本文从精子因素出发,研究其对精子载体法生产转基因动物效率的影响,共分为3部分。第一部分研究不同品种、不同年龄山羊的精子转染外源DNA的效率,筛选转染效率高的品种和精子供体。第二部分研究精液冷冻处理对山羊精子转染内化外源DNA效率的影响,并建立一种保证精液品质和稳定、高效的SMGT方法;第三部分用筛选的精子供体和优化的转染处理方法,将转入外源基因的精子进行人工授精生产转基因山羊,研究精子因素对生产转基因动物效率及对SMGT方法稳定性的影响。在第一部分实验中,比较不同品种、不同年龄山羊的精子转染外源DNA的效率,筛选转染效率高的品种和精子供体。选择2岁川东白山羊、波南F1山羊、波尔山羊和南江黄羊公羊共55只,14岁川东白山羊和波南F1山羊共137只,采集公羊精液,分析精液品质,用通过正交试验设计L16（44）建立的山羊精子和外源DNA处理方法转染,地高锌标记的原位杂交（in situ hybridization）检测方法,比较这些山羊的精子转染效率。结果表明:不同品种、年龄山羊的精子转染外源DNA的效率不同,其中1岁的川东白山羊转染效率最高。首先,不同品种山羊的精子转染内化外源DNA效率不同。其中转染效率较高的是川东白山羊和南江黄羊,最低的是波尔山羊,中等的是波南F1山羊。2岁南江黄羊和川东白山羊的精子转染效率分别为（38.48±17.54）%和（34.62±20.76）%,差异不显著（P>0.05）;波尔山羊的为（13.85±8.50）%,与南江黄羊和川东白山羊相比差异极显著（P<0.01）。同样,不同年龄山羊的精子转染内化外源DNA效率不同。川东白山羊精子结合外源DNA的能力随着年龄的增大而有减少的趋势。川
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论文正文 精子因素对精子载体法制备转基因山羊影响的研究
前言
第一部分 不同品种和年龄山羊的精子转染外源DNA的效率及山羊精子供体的筛选
材料与方法
结果
讨论
小结
参考文献
第二部分 冷冻处理对山羊精子转梁内化外源DNA效率的影响与机理分析
材料与方法
结果
讨论
小结
参考文献
第三部分 用转染外源DNA精子进行人工授精生产转基因山羊的研究
材料与方法
结果
讨论
小结
参考文献
全文总结
致谢
图片
文献综述 精子因素对精子载体法生产转基因动物的影响研究进展
参考文献
博士在读期间论文发表情况
发布时间: 2006-10-19
参考文献
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