论文摘要
淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae)是我国性传播疾病中发病率最高的疾病淋病的致病菌。病变威害人类健康，增加了感染HIV的危险，对我国公共卫生已构成十分严重的威胁。SELEX技术即配体指数富集的系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX)，是一种新型的体外筛选技术。适体(aptamer)，又称适配分子或适配子，其实质是运用SELEX技术从人工体外合成的随机寡核苷酸序列库中反复筛选得到的能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的一段寡核苷酸序列。适体的功能类似于抗体但明显优于抗体，具有靶分子范围广泛、亲和力和特异性高、制备方便、稳定性好等优点，在临床治疗和诊断方法等方面都具有广阔的应用前景。本研究旨在运用SELEX技术从人工体外合成的随机ssDNA文库中筛选到针对淋病奈瑟球菌的特异性适体，为建立快速而简便检测淋病奈瑟菌的实验室方法奠定基础。在所进行的研究中，首先在体外合成一个全长78个核苷酸中间含35个随机序列的随机核苷酸文库，取一定量ssDNA于binding buffer中95℃加热5分钟，迅速4℃冷却10分钟，再投入适量的淋病奈瑟菌，室温摇匀30分钟后离心分离，使用洗脱液悬起冲洗，反复4次，尽量洗去结合不强的片段。最后菌体和目的片段的复合体在99℃的蒸馏水加热3分钟后中释放出所筛选的目的片段，使用试剂盒纯化这些运用SELEX技术筛选到的寡核苷酸分子，以之为模板，经PCR扩增，产物纯化后做为下轮的文库。在反复筛选10轮后，我们继续使用了卡它莫拉氏菌，干燥奈瑟氏菌，灰色奈瑟氏菌进行了反筛工作，最后成功获得所需的针对淋病奈瑟菌的适体核苷酸分子，为今后运用适体技术快速检测淋病奈瑟菌的方法建立做了一些基础工作。