胆酸对心血管组织的损伤在妊娠期肝内胆汁淤积症胎儿并发症发生机制中作用的研究

论文摘要

妊娠期肝内胆汁淤秋症（intrahepatic choliestasis of pregnancy，ICP）是妊娠中、晚期特有的并发症，临床上以皮肤瘙痒和黄疸为特征，主要危害胎儿，使围产儿发病率和死亡率增高。其发病原因目前尚不清楚，可能与雌、孕激素、遗传、免疫及环境等因素有关。胆汁酸的毒性作用是近年来ICP的研究热点，可致发生胎膜早破、胎儿宫内窘迫、自发性早产或孕期羊水胎粪污染。特别是还有有胎儿生长受限，不可预测的胎儿突然死亡，新生儿颅内出血、新生儿神经系统后遗症等。其中，不可预测的胎儿突然死亡已成为临床医生非常棘手的问题，给社会和个人家庭带来了巨大的经济损失。ICP孕妇血清胆汁酸的组份中，以胆酸（CA）水平增高为主。因此胆酸可能是ICP中导致胎儿及新生儿死亡的罪魁祸首。本研究利用原代培养的乳鼠心肌细胞，通过MTT法探究胆酸在体外对该细胞存活率的抑制作用，并通过激光共聚焦显微镜技术结合细胞敏感的钙离子荧光指示剂Fluo 3／AM探讨胆酸对心肌细胞“钙超载”影响在ICP胎儿心源性猝死发病机制中的作用。此外，本研究还利用原代培养的人脐静脉内皮细胞，通过MTT和ELISA方法探讨胆酸对内皮系统增殖及其完整性和内分泌功能的影响，从而明确胆酸对内皮系Pane统的损伤在ICP胎儿并发症发病机制中的作用。通过临床体液内分泌和心肌酶谱学的研究来证实体外研究的发现，进一步明确胆酸对心血管系统的损伤作用，为临床上正确评估ICP孕妇的胎儿安危提供相关指标，并针对该疾病给予早期的诊断和治疗，以改善胎儿及新生儿的病情和预后，降低围生儿的的发病率和死亡率，减轻社会和个人家庭负担。第一部分胆酸对乳鼠心肌细胞损伤机制的研究目的：通过研究胆酸对培养的乳鼠心肌细胞活性和细胞内“钙超载”的影响，探讨胆酸对心肌细胞的损伤在ICP胎儿并发症发病机制中的作用。方法：1．MTT法检测不同浓度、不同作用时间的胆酸对乳鼠心肌细胞存活率的影响；2．激光共聚焦显微镜方法检测胆酸对乳鼠心肌细胞内“钙超载”的影响。结果：1．随着胆酸浓度的增高、作用时间的延长心肌细胞存活率降低，呈明显时间-浓度依赖性；2．随着胆酸浓度的增高，心肌细胞内游离钙释放增加，呈明显的浓度依赖性。结论：胆酸对心肌细胞存活率的抑制作用有很强的时间-浓度依赖性，这种抑制作用除了对心肌细胞的直接损伤外，还可能与其造成细胞内“钙超载”有关。胆酸可能通过损害胎儿的心肌细胞引起ICP不可预测的产科意外。第二部分胆酸对人脐静脉内皮细胞损伤机制的研究目的通过研究胆酸对培养的人原代脐静脉内皮细胞（HUVEC）生长率和分泌VEGF及释放vWF的影响，探讨胆酸对内皮系统的损伤在ICP发病机制中的作用。方法1．MTT法检测不同浓度组、不同作用时间的胆酸对HUVEC生长率的影响；2．ELISA方法检测胆酸对HUVEC分泌VEGF和vWF的影响结果1．0.5mmol／L、1mmol／L、2mmol／L组胆酸作用24h后的平均生长率分别是64.8％、60.2％、43.6％；作用48h各组的平均生长率分别为54.1％、43.4％、21.0％；作用72h各组的平均生长率分别为47.6％、34.0％、7.9％。48和72小时组细胞生长率与浓度均呈明显负相关：2mmol／L，1mmol／L组细胞生长率与时间均呈明显负相关。2．随着胆酸浓度的增高，HUVEC分泌VEGF减少，呈明显的负相关；释放vWF增加，呈明显的正相关。结论胆酸对HUVEC的生长率有很强的时间-浓度依赖性抑制作用，这种抑制作用除了直接损伤内皮细胞外，还可能与其抑制内皮细胞本身的分泌VEGF有关。胆酸可能通过影响内皮系统引起ICP胎儿的一系列临床、病理及病理生理改变。第三部分胆汁酸对胎儿心血管系统损伤的研究目的通过对比研究ICP组胎儿与正常对照组胎儿间脐血胆汁酸水平与脐血中内皮细胞分泌的VEGF、vWF浓度以及心肌酶谱的变化的相关性，探讨胆汁酸对内皮系统和心肌细胞的损伤在ICP胎儿并发症发生机制中的作用。方法1．血清生化学检测脐血胆汁酸水平2．ELISA方法检测脐血中VEGF及vWF浓度3．心肌酶谱学检测脐血中心肌酶（CK-MB、LDH）的改变结果1．与正常对照组相比，ICP组脐血胆汁酸水平升高，P＜0.052．与正常对照组相比，ICP组脐血VEGF及vWF浓度均升高，P＜0.053．与正常对照组相比，ICP组脐血心肌酶CK-MB、LDH浓度皆升高，P＜0.054．脐血胆汁酸水平与脐血VEGF浓度呈负相关，与脐血vWF浓度呈负相关5．脐血胆汁酸水平与脐血心肌酶CK-MB、LDH浓度呈正相关结论脐血胆汁酸对胎儿内皮及心肌均造成损伤。脐血胆汁酸可能通过影响胎儿的内皮系统及心肌细胞引起ICP一系列相关胎儿并发症。小结综上所述，本研究结果提示：1．随着胆酸浓度的增高、作用时间的延长心肌细胞存活率降低，呈明显时间-浓度依赖性；2．随着胆酸浓度的增高，心肌细胞内游离钙释放增加，呈明显的浓度依赖性；3．胆酸对心肌的抑制作用除了直接损伤外，还可能与其造成细胞内“钙超载”有关。胆酸可能通过损害胎儿的心肌细胞引起ICP不可预测的产科意外。4．胆酸对HUVEC的生长率有很强的时间-浓度依赖性抑制作用；5．随着胆酸浓度的增高，HUVEC分泌VEGF减少，呈明显的负相关；释放vWF增加，呈明显的正相关。6．胆酸对HUVEC的抑制作用除了直接的损伤作用外，还可能与其抑制内皮细胞本身的分泌VEGF有关。胆酸可能通过影响孕妇及其胎儿的内皮系统引起ICP的一系列临床、病理及病理生理改变。7．脐血胆汁酸水平与脐血VEGF浓度呈负相关，与脐血vWF浓度呈负相关。8．脐血胆汁酸水平与脐血心肌酶CK-MB、LDH浓度呈正相关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 胆酸对乳鼠心肌细胞损伤机制的研究
• 分题一 胆酸对乳鼠心肌细胞存活率的影响
• 分题二 胆酸对乳鼠心肌细胞内“钙超载”的影响
• 第二部分 胆酸对人脐静脉内皮细胞增殖及分泌功能的影响
• 分题一 胆酸对人脐静脉内皮细胞增殖的影响
• 分题二 胆酸对人脐静脉内皮细胞分泌功能的影响
• 第三部分 脐血总胆汁酸水平与胎儿心肌及内皮细胞损伤的关系
• 分题一 脐血总胆汁酸水平与胎儿心肌酶谱改变的关系
• 分题二 脐血总胆汁酸对胎儿内皮系统损伤的研究
• 综述
• 综述一 胆酸与妊娠期肝内胆汁淤积症
• 综述二 妊娠期肝内胆汁淤积症的最新研究进展
• 缩写词
• 附录 研究生期间发表论文及获得的奖励情况
• 致谢