本文主要研究内容
作者吴锦艳,田宏,蒙学莲,惠小婷,王耀杰,关玉华,尚佑军,刘永生,张志东（2019）在《慢病毒介导稳定表达增强小反刍兽疫病毒复制的山羊Vero/SLAM细胞系的建立》一文中研究指出：利用Gateway技术和慢病毒表达系统将山羊淋巴细胞信号活化因子SLAM稳定整合在Vero细胞基因组染色体上,建立稳定表达可增强小反刍兽疫病毒（PPRV）复制的SLAM的Vero阳性细胞亚克隆,并验证阳性细胞亚克隆Vero/SLAM表达SLAM的活性、遗传稳定性及其对PPRV复制的增殖效果。分离山羊外周血淋巴细胞,提取基因组Total RNA,一步RT-PCR获得完整ORF的SLAM基因,采用BP及LR位点的基因重组技术,构建入门载体pDONR/SLAM并获得表达骨架pDEST/SLAM,与Packaging Mix pLP1、pLP2及VSV-G共转染293-FT细胞,获得SLAM复制缺陷型慢病毒样粒子,用其感染Vero细胞,杀稻瘟菌素抗性筛选获得阳性细胞克隆,通过靶标基因扩增、间接免疫荧光、激光扫描共聚焦显微技术、Western blot免疫印迹检测技术、致细胞病变效应及Realtime RT-PCR等技术分别验证SLAM基因组整合、转录,SLAM蛋白表达、反应活性以及PPRV在表达SLAM阳性细胞亚克隆上的增殖效果。结果显示:SLAM受体基因被稳定整合在Vero细胞基因组染色体上,该受体蛋白表达于细胞周质,建立的细胞连续传代不丢失,接种病毒后致细胞病变时间由4～7d缩短为3.5d,TCID50·0.1mL-1由4.25增加为5.67,相对于正常Vero细胞,整合有SLAM的Vero细胞,由于表达了PPRV特异的细胞受体使PPRV对其易感性显著增强。成功建立一株稳定表达靶向增强PPRV复制的Vero/SLAM细胞:该细胞表达的SLAM具有明显增强PPRV复制的功能,不仅可以从细胞模型水平阐明增强PPRV复制的关键靶基因,也为PPRV感染引起宿主细胞的变化以及对机体的致病机制等提供研究工具。
Abstract
li yong Gatewayji shu he man bing du biao da ji tong jiang shan yang lin ba xi bao xin hao huo hua yin zi SLAMwen ding zheng ge zai Veroxi bao ji yin zu ran se ti shang ,jian li wen ding biao da ke zeng jiang xiao fan chu shou yi bing du （PPRV）fu zhi de SLAMde Veroyang xing xi bao ya ke long ,bing yan zheng yang xing xi bao ya ke long Vero/SLAMbiao da SLAMde huo xing 、wei chuan wen ding xing ji ji dui PPRVfu zhi de zeng shi xiao guo 。fen li shan yang wai zhou xie lin ba xi bao ,di qu ji yin zu Total RNA,yi bu RT-PCRhuo de wan zheng ORFde SLAMji yin ,cai yong BPji LRwei dian de ji yin chong zu ji shu ,gou jian ru men zai ti pDONR/SLAMbing huo de biao da gu jia pDEST/SLAM,yu Packaging Mix pLP1、pLP2ji VSV-Ggong zhuai ran 293-FTxi bao ,huo de SLAMfu zhi que xian xing man bing du yang li zi ,yong ji gan ran Veroxi bao ,sha dao wen jun su kang xing shai shua huo de yang xing xi bao ke long ,tong guo ba biao ji yin kuo zeng 、jian jie mian yi ying guang 、ji guang sao miao gong ju jiao xian wei ji shu 、Western blotmian yi yin ji jian ce ji shu 、zhi xi bao bing bian xiao ying ji Realtime RT-PCRdeng ji shu fen bie yan zheng SLAMji yin zu zheng ge 、zhuai lu ,SLAMdan bai biao da 、fan ying huo xing yi ji PPRVzai biao da SLAMyang xing xi bao ya ke long shang de zeng shi xiao guo 。jie guo xian shi :SLAMshou ti ji yin bei wen ding zheng ge zai Veroxi bao ji yin zu ran se ti shang ,gai shou ti dan bai biao da yu xi bao zhou zhi ,jian li de xi bao lian xu chuan dai bu diu shi ,jie chong bing du hou zhi xi bao bing bian shi jian you 4～7dsu duan wei 3.5d,TCID50·0.1mL-1you 4.25zeng jia wei 5.67,xiang dui yu zheng chang Veroxi bao ,zheng ge you SLAMde Veroxi bao ,you yu biao da le PPRVte yi de xi bao shou ti shi PPRVdui ji yi gan xing xian zhe zeng jiang 。cheng gong jian li yi zhu wen ding biao da ba xiang zeng jiang PPRVfu zhi de Vero/SLAMxi bao :gai xi bao biao da de SLAMju you ming xian zeng jiang PPRVfu zhi de gong neng ,bu jin ke yi cong xi bao mo xing shui ping chan ming zeng jiang PPRVfu zhi de guan jian ba ji yin ,ye wei PPRVgan ran yin qi su zhu xi bao de bian hua yi ji dui ji ti de zhi bing ji zhi deng di gong yan jiu gong ju 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自畜牧兽医学报的吴锦艳,田宏,蒙学莲,惠小婷,王耀杰,关玉华,尚佑军,刘永生,张志东，发表于刊物畜牧兽医学报2019年01期论文，是一篇关于小反刍兽疫病毒论文,细胞系论文,技术论文,慢病毒表达系统论文,畜牧兽医学报2019年01期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自畜牧兽医学报2019年01期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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