论文摘要
目的:应用分化诱导剂SAHA（Suberoylanilide hydroxamic acid）处理体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞,观察鉴定SAHA对人肝癌细胞的分化诱导作用,并初步探讨其作用机理。 方法:人肝癌SMMC-7721细胞用含10%胎牛血清的1640培养基置37℃、5%CO2培养箱培养。实验分为对照组和不同浓度SAHA处理组,细胞接种12h后进行药物处理。倒置显微镜和透射电镜观察SAHA对SMMC-7721细胞形态和超微结构的影响;MTT比色法测定SAHA对SMMC-7721细胞增殖的抑制情况并绘制细胞增殖抑制曲线;免疫细胞化学检测SAHA对SMMC-7721细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）和甲胎蛋白（AFP）表达的影响;流式细胞分析术（FCM）分析细胞周期;RT-PCR方法检测处理前后SMMC-7721细胞中p21WAF1 mRNA的表达变化。 结果:倒置显微镜和透射电镜观察显示,经SAHA处理的细胞增殖速度显著减慢,细胞体积增大,细胞核较小,形状较为规则,核仁数量减少、体积变小,核内常染色质增多而异染色质减少,核质比例减小,细胞质内线粒体数量增多、线粒体嵴发达,高尔基体较为典型,粗糙型内质网增多,呈现出与正常上皮细胞相似的形态变化;MTT比色法测定结果显示不同浓度（2.5、5.0、7.5、10.0uM）SAHA对SMMC-7721细胞的增殖均有抑制作用,并有明显的剂量依赖和时间依赖关系;免疫细胞化学检测显示SAHA能显著降低PCNA和AFP在SMMC-7721细胞中的表达;流式细胞仪检测结果显示,SMMC-7721细胞经SAHA处理后,G0/G1期细胞明显增加,S期细胞则明显减少,细胞被阻滞于G0/G1期;RT-PCR检测结果表明,SAHA作用12h后SMMC-7721细胞中p21WAF1 mRNA的表达即有增加,24h后更为明显。 结论:SAHA能有效抑制人肝癌SMMC-7721细胞的恶性增殖活动,对人肝癌细胞具有显著的诱导分化作用;其诱导肝癌细胞分化的机理可能与抑制组蛋白去乙酰化酶（HDAC）的活性,上调p21WAF1 mRNA的表达,使肝癌细胞发生G0/G1期阻滞有关。
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