三氯化铝对鸡脾淋巴细胞毒性的体外研究

论文摘要

以体外培养1月龄伊莎蛋雏鸡脾脏淋巴细胞为研究对象,在培养液中添加不同浓度的三氯化铝（AlCl3）,对照组添加相同体积的培养液,应用MTT比色法、放免法、半定量RT-PCR和流式细胞术等方法观测铝对鸡脾脏淋巴细胞活性、细胞增殖、免疫细胞因子、抗氧化功能、钙稳态及细胞凋亡等的影响,旨在探讨铝对鸡免疫细胞毒作用及其机制,为铝毒危害的解除提供理论依据。研究结果表明:1应用台盼蓝排斥试验和MTT比色法测得染铝24h后鸡脾脏淋巴细胞的半数抑制浓度(IC50)为0.832±0.01 mg/ml。2经MTT比色法测得低剂量铝能明显抑制T细胞增殖,对B细胞增殖不起作用,高剂量铝对T、B细胞增殖均起抑制作用。3铝可增加淋巴细胞内乳酸脱氢酶（LDH）的漏出率,导致细胞活性下降,说明铝可改变淋巴细胞膜通透性。4染铝组脾淋巴细胞培养液中白介素-2（IL-2）和肿瘤坏死因子（TNF-α）含量低于对照组,组间差异显著或极显著（p＜0.01;p＜0.05）,且染铝浓度和它们的含量呈负相关,提示IL-2和TNF-α含量的减少可能是铝致免疫毒性的机理之一。5染铝组鸡脾淋巴细胞内一氧化氮合酶（NOS）活性、一氧化氮（NO）和丙二醛（MDA）含量高于对照组,超氧化物岐化酶（SOD）和谷胱苷肽过氧化物酶（GSH-Px）活性低于对照组,组间差异显著或极显著（p＜0.01;p＜0.05）,且呈现剂量-效应关系。说明铝可引发鸡脾脏淋巴细胞氧化胁迫,进而发挥其免疫细胞毒作用。6应用流式细胞术和吖啶橙-溴化乙锭（AO/EB）双荧光染色法分别从生化改变和形态学角度检测了铝致鸡脾脏淋巴细胞凋亡情况。随染铝浓度的增加,淋巴细胞膜皱缩、出芽、胞浆稀少、染色体固缩、边聚、碎裂等典型凋亡特征的细胞数逐渐增多;G0/G1期细胞数量逐渐增加,S和G2/M期细胞数量逐渐减少,细胞增殖指数降低;凋亡指数和细胞凋亡率升高,染铝组与对照组间比较差异均极显著（p＜0.01）。表明铝可通过诱导免疫细胞凋亡发挥免疫毒性作用。7随染铝浓度的增加,淋巴细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)逐渐升高,钙调蛋白（CaM）mRNA表达减少,与对照组比,差异显著或极显著（p＜0.05;p＜0.01）。表明铝可致淋巴细胞钙稳态失衡。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 引言
• 1.1 铝免疫毒性的研究进展
• 1.1.1 铝对免疫器官的影响
• 1.1.2 铝对细胞免疫的影响
• 1.1.3 铝对体液免疫的影响
• 1.1.4 铝对细胞因子的影响
• 1.1.5 铝对非特异免疫功能的影响
• 1.1.6 铝对红细胞免疫功能的影响
• 1.2 铝毒性机制的研究进展
• 1.2.1 铝与细胞膜的通透性
• 1.2.2 铝与脂质过氧化和抗氧化保护系统
• 1.2.3 铝的遗传毒性
• 1.2.4 铝与DNA损伤
• 1.2.5 铝对钙代谢及有关酶的影响
• 1.2.6 铝与细胞凋亡
• 1.3 试验的目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验主要仪器与材料
• 2.1.1 主要仪器
• 2.1.2 主要试剂
• 2.2 铝毒剂量的确定及鸡脾淋巴细胞悬液的制备、培养及处理
• 2.2.1 铝毒剂量的确定和鸡脾淋巴细胞悬液的制备
• 2.2.2 鸡脾脏淋巴细胞的培养和处理
• 2.3 检测项目与方法
• 50)测定'>2.3.1 铝致鸡脾脏淋巴细胞半数抑制浓度(IC₅₀)测定
• 2.3.2 三氯化铝对淋巴细胞形态的影响
• 2.3.3 三氯化铝对淋巴细胞活性的检测
• 2.3.4 鸡脾脏淋巴细胞上清液中IL-2、TNF-α的含量测定
• 2.3.5 鸡脾脏淋巴细胞内一氧化氮代谢的检测
• 2.3.6 鸡脾脏淋巴细胞内氧化与抗氧化功能的检测
• 2.3.7 细胞凋亡的检测
• 2.3.8 淋巴细胞内钙稳态检测
• 2.4 试验数据的分析与统计
• 3 结果与讨论
• 50)的测定结果'>3.1 三氯化铝致鸡脾淋巴细胞半数抑制浓度(IC₅₀)的测定结果
• 3.2 三氯化铝对鸡脾淋巴细胞形态的影响
• 3.3 三氯化铝对鸡脾淋巴细胞毒性的影响结果
• 3.3.1 淋巴细胞增殖的结果
• 3.3.2 三氯化铝对淋巴细胞活性的影响
• 3.4 鸡脾脏淋巴细胞内IL-2、TNF-α含量测定结果
• 3.5 鸡脾脏淋巴细胞内NO代谢的结果
• 3.6 鸡脾淋巴细胞氧化与抗氧化功能
• 3.7 鸡脾淋巴细胞荧光染色的结果
• 3.8 鸡脾淋巴细胞细胞周期分析结果
• 3.8.1 铝对鸡脾淋巴细胞细胞周期的影响
• 3.8.2 铝对鸡脾淋巴细胞凋亡率的影响
• 3.9 钙稳态变化的结果
• 2+]i测定结果'>3.9.1 鸡脾淋巴细胞内[Ca²⁺]i测定结果
• 3.9.2 鸡脾淋巴细胞内CaMmRNA的表达
• 4 讨论
• 50的测定'>4.1 铝致淋巴细胞IC₅₀的测定
• 4.2 铝对淋巴细胞形态的影响
• 4.3 铝对淋巴细胞培养上清液中LDH活性的影响
• 4.4 铝对淋巴细胞内钙稳态的影响
• 4.5 铝对淋巴细胞增殖和细胞因子的影响
• 4.6 铝对淋巴细胞内NO代谢的影响
• 4.7 铝对淋巴细胞内氧化和抗氧化功能的影响
• 4.8 铝对淋巴细胞凋亡的影响
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文