论文摘要
第一部分诱导雌性小鼠产生抗人uPA抗体免疫方法和效价分析目的建立一种利用人源uPA分子作为抗原诱导雌性昆明小鼠产生抗人uPA抗体的免疫方法,检测该免疫方法的有效性及稳定性。方法将性成熟雌性昆明小鼠随机分为5组:空白对照组（不予任何处理）、佐剂对照组（100μl生理盐水+等体积佐剂）、低剂量免疫组（20μg/100μl uPA+等体积佐剂）、中剂量免疫组（40μg/100μl uPA+等体积佐剂）和高剂量免疫组（80μg/100μl uPA+等体积佐剂）。每2周皮下多点注射免疫1次,于第3次免疫后1周取其尾动脉血清以酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）检测各组抗体效价,另外加设一组,即阴性对照组（PBS溶液代替样本血清）便于ELISA法检测中的比较。结果以ELISA法检测各组血清样本中抗人uPA多克隆抗体相对含量,uPA三个剂量免疫组与三个对照组（阴性对照组、空白对照组和佐剂对照组）相比,抗人uPA多克隆抗体相对含量是增高的,差异具有统计学意义（P<0.05）;免疫组血清中抗人uPA多克隆抗体效价均达到1:10240以上。结论利用人源uPA分子作为抗原诱导雌性昆明小鼠产生抗人uPA抗体的免疫方法,不仅可以建立一种使小鼠体内产生稳定uPA抗体的实验方法,而且小鼠体内的抗体可以达到较高水平。第二部分抗人uPA抗体对雌性小鼠生殖能力的影响实验一诱导雌性小鼠产生抗人uPA抗体后对其交配和妊娠情况的影响目的采用人注射用uPA免疫雌性小鼠,小鼠体内产生抗人uPA抗体后,观察对雌性小鼠妊娠情况的影响。方法动物分组及免疫方法同第一部分,于免疫4次后,分别将实验各组雌性小鼠与未经任何处理的同周龄雄性小鼠进行交配实验,于妊娠第7天解剖观察并记录妊娠率、平均胚胎着床数目。结果uPA低、中、高剂量免疫组雌性小鼠的妊娠率以及胚胎着床数目与空白和佐剂对照组相比,妊娠率及胚胎着床数目降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。空白和佐剂对照组之间差异无统计学意义（P>0.05）。结论人注射用uPA免疫雌性小鼠,可干扰小鼠的生殖功能,使生育能力显著下降,提示uPA可能成为免疫避孕的有效靶点。实验二诱导雌性小鼠产生抗人uPA抗体后对其体外受精能力的影响目的研究采用人注射用uPA免疫雌性小鼠,小鼠体内产生抗人uPA抗体后,对小鼠的卵细胞体外受精能力影响,探讨uPA免疫使雌性小鼠生育力下降的机制。方法动物分组及免疫方法同第一部分,于第12次免疫后1周,给予各实验组雌性小鼠PMSG/hCG促排卵后,获卵细胞团,记录卵细胞数目,与未经任何处理的健康雄性小鼠精子进行体外受精实验,记录受精率。卵巢组织经4%多聚甲醛固定,常规脱水、透明、包埋、切片、染色,记录黄体数目。结果1.排卵数目uPA低、中、高剂量免疫组雌性小鼠排出的卵细胞数目分别与空白和佐剂对照组相比,明显减少,差异具有统计学意义（P<0.05）;空白和佐剂差异无统计学意义（P >0.05）。2.体外受精率与空白对照组相比,佐剂对照组、低、中、高剂量免疫组的受精率有所降低,但是差异无统计学意义（P>0.05）。3.卵裂情况A+B级的卵裂的胚胎率在中、高剂量组占的比例明显比空白对照组、佐剂对照组和低剂量组要低,差异具有统计学意义（P<0.01）。空白对照组、佐剂对照组及低剂量组之间差异无统计学意义（P >0.05）。4.平均黄体数目卵巢组织切片中平均黄体数目分别与空白和佐剂对照组相比,uPA低、中、高剂量免疫组明显减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论采用人注射用uPA免疫雌性小鼠,小鼠体内产生抗人uPA抗体后,影响雌性小鼠卵泡排放、卵细胞受精能力,导致排卵数目、体外受精率和平均黄体数目下降,胚胎质量下降。实验三体外实验观察含抗人uPA抗体血清干预正常雌性小鼠卵细胞对其受精能力的影响目的观察该含抗人uPA抗体血清对正常雌性小鼠卵细胞的受精能力和存活情况的影响,探讨uPA免疫使雌性小鼠生育力下降的机制。方法经过PMSG/hCG促排卵获得健康雌性小鼠卵细胞团,将该卵细胞团与各实验组的小鼠血清共同孵育30min后,再与未经任何处理的健康雄性小鼠精子进行体外受精实验,记录受精率和卵细胞死亡率。结果1.体外受精率经过与uPA低、中、高剂量免疫组的血清共同孵育的卵细胞受精率比空白对照和佐剂对照组降低,并且差异有统计学意义（P<0.01）。空白和佐剂对照组受精率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。2.卵细胞的死亡率含抗人uPA抗体的血清干预正常小鼠卵细胞,不仅受精率下降,并且明显的出现较多死亡的卵细胞,其中以高剂量免疫组卵细胞的死亡率为最高,高剂量组与空白组相比,差异有统计学意义（P <0.01）,低、中剂量免疫组与空白和佐剂对照组相比,虽然死亡率有所升高,但是差异无统计学意义（P >0.05）。空白和佐剂对照组死亡率差异无统计学意义（P >0.05）。结论以抗人uPA抗体血清干预正常小鼠卵细胞,观察该卵细胞体外受精情况,发现体外培养的卵细胞其体外受精率下降,死亡率升高,提示抗人uPA抗体血清可以降低正常雌性小鼠卵细胞的受精能力和卵细胞的存活能力。
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