论文摘要
艾滋病（acquire immunodeficiency syndrome,AIDS）由人免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）引起,已成为本世纪危害人类健康最凶险的瘟疫。HIV可经过静脉吸毒、血制品污染、性交及母婴垂直感染等方式传播。除HIV本身的种类和数量、生殖器溃疡及其它性传播疾病外,宿主的HIV相关基因变异也是影响HIV感染传播和AIDS患者预后的重要因素之一。最近研究发现,树突状细胞（Dendrtic cell,DC）表达的特异性表面分子DC-SIGN与HIV-1感染传播密切相关,这是通过DC-SIGN与HIV-1包膜糖蛋白gp120结合实现的。DC-SIGN由胞浆外区、跨膜区和胞浆区组成,胞浆外区又可分为碳水化合物识别区和颈区,碳水化合物识别区是HIV的结合部位,颈区的重复序列变化可导致DC-SIGN空间结构变化,影响碳水化合物识别区与HIV-1gp120结合,继而DC细胞就不能将HIV病毒颗粒传递给CD4+T细胞。鉴于DC-SIGN与HIV结合有赖于碳水化合物识别区结合位点,而结合能力则取决于颈区的重复序列,故理论上有可能通过外源性给予含碳水化合物识别区和颈区的DC-SIGN蛋白来封闭HIV-1gp120上的结合位点,或使用针对DC-SIGN的特异性抗体竞争结合树突状细胞表面的DC-SIGN,从而阻断HIV感染。为此,本研究通过克隆人DC-SIGN基因片段,构建DC-SIGN家蚕表达系统,进行目的产物表达及生物活性分析,为制备完全人源抗DC-SIGN单链抗体及开发新的艾滋病防治产品奠定基础。目的:克隆人DC-SIGN基因片段,构建DC-SIGN家蚕表达系统,进行目的产物表达、鉴定及生物活性分析。方法:采用Fiocn密度梯度离心法分离正常人外周血单个核细胞（PBMC）,加入rhGM-CSF、rhIL-4体外培养、刺激其分化为DC细胞;抽提DC细胞总RNA,RT-PCR扩增出DC-SIGN基因片段,通过TA克隆插入pMD18-T Vector载体中,构建重组子pMD18-DC-SIGN;以pMD18-DC-SIGN为模板,重新设计引物扩增出带酶切位点的DC-SIGN片段,定向插入家蚕表达载体pBacPAK8中并转化大肠杆菌,用酶切鉴定,得到编码目的基因的重组质粒pBacPAK8-DC-SIGN,与线性化的Bm-BacPAK6病毒基因组DNA共转染家蚕细胞,经过体内重组,空斑筛选得到重组病毒Bm-BacPAK-DC-SIGN,PCR鉴定重组病毒Bm-BacPAK-DC-SIGN;将Bm-BacPAK-DC-SIGN感染家蚕细胞BmN表达目的产物,采用SDS-PAGE、Westernblot检测表达产物DC-SIGN蛋白片段;将家蚕细胞表达的目的产物与HIV-1包膜糖蛋白gp120蛋白孵育,以检测DC-SIGN蛋白片段的生物活性。结果:①成功克隆了正常人DC-SIGN基因片段;②构建了稳定表达人DC-SIGN蛋白片段的家蚕杆状病毒载体表达系统;③成功表达了DC-SIGN蛋白片段,其生物活性分析显示能够特异性地与HIV-1包膜糖蛋白gp120结合。结论:成功地在家蚕杆状病毒载体表达系统中表达了正常人DC-SIGN蛋白片段,后者具有天然DC-SIGN蛋白样的生物活性,为其抗体制备及AIDS防治药物的研发奠定了基础。
论文目录
相关论文文献
- [1].金雀花碱的生物活性研究进展[J]. 现代畜牧科技 2020(03)
- [2].生物活性水对油菜种子萌发及幼苗生长的影响[J]. 中国种业 2010(09)
- [3].生物活性纸及其制品[J]. 中国造纸 2008(03)
- [4].生物活性水对番茄种子萌发及幼苗生长的影响[J]. 北方园艺 2010(14)
- [5].茶多酚生物活性研究进展[J]. 农业技术与装备 2020(06)
- [6].生物活性水对白菜品质的影响[J]. 榆林学院学报 2015(04)
- [7].银杏多糖的生物活性研究进展[J]. 安徽农业科学 2009(32)
- [8].玉叶金花化学成分和生物活性的研究进展[J]. 中国新药杂志 2017(05)
- [9].微藻多糖生物活性研究进展[J]. 中国海洋药物 2012(03)
- [10].松塔多糖提取及生物活性研究[J]. 中国林副特产 2018(02)
- [11].生物活性肥配方筛选及其对土壤理化性质和玉米经济效益的影响[J]. 水土保持通报 2014(06)
- [12].生物活性水对玉米种子萌发及幼苗生长的影响[J]. 长江蔬菜 2014(20)
- [13].生物活性水在蛋鸡生产中的应用研究[J]. 湖北农业科学 2010(04)
- [14].基于生物活性方法对红花注射液质量评价研究[J]. 山西中医药大学学报 2019(06)
- [15].马鞭草醇提物对小鼠IL-2生物活性的影响[J]. 甘肃中医学院学报 2008(02)
- [16].3-取代吲哚酮衍生物的生物活性研究进展[J]. 化学试剂 2019(04)
- [17].多肽的生物活性及产品开发研究进展[J]. 农产品加工 2018(12)
- [18].巴豆中佛波醇酯类成分及其生物活性研究进展[J]. 中成药 2012(08)
- [19].乳源生长因子生物活性研究进展[J]. 中国乳品工业 2008(06)
- [20].靛蓝的生物活性研究进展[J]. 染料与染色 2019(04)
- [21].生物活性小肽的研究进展[J]. 浙江化工 2010(11)
- [22].生物活性填料增强复合树脂的研究进展[J]. 口腔医学 2019(12)
- [23].海参多肽提取纯化及其生物活性研究进展[J]. 食品工业 2019(02)
- [24].生物活性美容多肽的研究进展综述[J]. 中西医结合心血管病电子杂志 2019(07)
- [25].利用荧光素酶报告基因检测维生素D生物活性[J]. 药物分析杂志 2017(07)
- [26].一种新型生物活性物分子探针的合成[J]. 中国抗生素杂志 2017(08)
- [27].活性染料对海洋生物活性纤维染色性能的研究[J]. 山东纺织科技 2012(03)
- [28].卡拉胶的生物活性及分子修饰研究进展[J]. 广东化工 2012(11)
- [29].核桃肽生物活性的研究进展[J]. 中国食物与营养 2018(12)
- [30].冬凌草甲素的结构修饰与生物活性研究进展[J]. 有机化学 2017(07)