论文摘要
目的：探讨和厚朴酚（HNK）抑制T24膀胱癌细胞增殖、诱导T24膀胱癌细胞凋亡的作用机制,及与羟基喜树碱（HCPT）联合作用,对诱导T24膀胱癌细胞凋亡的影响。方法：设对照组和单纯HNK处理组、单纯HCPT处理组、HNK联合HCPT处理组。采用MTT法分别测定HNK和HCPT处理T24膀胱癌细胞的IC10值,根据IC10值确定HNK和HCPT的实验浓度。实验浓度（3.12-25uM） HNK和1.25ug/ml HCPT处理T24膀胱癌细胞,显微镜进行细胞形态学观察,培养24,48,72小时MTT法检测T24膀胱癌细胞增殖活性,用Annexin/PI及流式细胞仪检测T24膀胱癌细胞凋亡率,用Western blot法检测T24膀胱癌细胞Caspase-3、-9磷酸化NF-κB-p65、Akt和ERK蛋白表达结果：根据T24膀胱癌细胞形态学观察,单纯HNK在实验浓度范围内,对T24膀胱癌细胞生长抑制作用较弱.最高实验浓度25uM HNK仅引起少量T24膀胱癌细胞的死亡;单纯1.25 ug/ml HCPT有抑制部分T24膀胱癌细胞生长作用：HNK与HCPT联合,对T24膀胱癌细胞生长抑制作用显著增加,随着HNK浓度的增加,抑制作用更加明显。MTT法检测T24膀胱癌细胞增殖活性,单纯HNK处理组对T24膀胱癌细胞增殖活性无明显抑制作用;单纯HCPT处理组,培养24小时.对T24膀胱癌细胞增殖活性无明显抑制作用,培养48和72小时,对T24膀胱癌细胞增殖活性有明显抑制作用,呈作用时间依赖性；HNK联合HCPT处理组,对T24膀胱癌细胞增殖活性有极显著抑制作用,呈HNK浓度依赖性和作用时间依赖性,与单纯HNK处理组、单纯HCPT处理组比较,对T24膀胱癌细胞增殖活性抑制作用有显著性差异。Annex in/PI及流式细胞仪检测T24膀胱癌细胞凋亡率,低浓度单纯HNK（3.12-12.5 uM）无明显诱导T24膀胱癌细胞凋亡作用,高浓度HNK （25 uM）显著诱导T24膀胱癌细胞凋亡,呈HNK浓度依赖性;单纯HCPT处理组有显著诱导T24膀胱癌细胞凋亡作用；HNK联合HCPT处理组有极显著诱导T24膀胱癌细胞凋亡作用,呈HNK浓度依赖性,与单纯HNK处理组、单纯HCPT处理组比较,诱导T24膀胱癌细胞凋亡作用有显著性差异；Western blot检测显示T24膀胱癌细胞Caspase-3,-9低表达,NF-κB、Akt、ERK高表达。单纯HCPT对T24膀胱癌细胞Caspase-3,-9、NF-κB-p65、Akt、ERK蛋白表达无明显影响作用;单纯HNK有诱导Caspase-3,-9蛋白表达,抑制磷酸化NF-KB-p65、Akt、ERK蛋白表达作用;NHK联合HCPT显著诱导Caspase-3,-9蛋白表达,呈HNK浓度依赖性,并显著抑制磷酸化NF-κB-p65、Akt、ERK蛋白表达,呈HNK浓度依赖性。结论：HNK通过诱导T24膀胱癌细胞Caspase表达和抑制NF-κB、Akt和ERK的磷酸化途径,诱导T24膀胱癌细胞凋亡。HNK联合HCPT诱导T24膀胱癌细胞凋亡抑制T24膀胱癌细胞增殖具有协同作用。