孔娜娜：马铃薯StAAP1和StAAP8基因的克隆及功能研究论文

2020-02-28阅读(173)

本文主要研究内容

作者孔娜娜（2019）在《马铃薯StAAP1和StAAP8基因的克隆及功能研究》一文中研究指出：氨基酸转运蛋白介导植物体内各类氨基酸的转运,对植物的生长和发育至关重要。植物中的氨基酸转运蛋白主要分为ATFs(the amino acid transporter family)和APCs(the amino acid polyamine choline transporter)两个家族,其中AAPs(amino acid permease)亚家族属于ATFs家族,到目前为止AAPs(氨基酸通透酶)是植物中研究的相对比较清楚的一种氨基酸转运蛋白。本研究应用生物信息学方法对马铃薯AAP基因家族成员的基因结构、蛋白结构特征以及在马铃薯组织中的表达模式进行了分析,构建了AAP家族蛋白进化树,并从马铃薯栽培品种Desiree中克隆得到了StAAP1和StAAP8两个基因,构建了StAAP1和StAAP8基因过表达载体,进行马铃薯遗传转化,并分析了StAAP1和StAAP8蛋白的亚细胞定位,初步研究StAAP1和StAAP8基因在马铃薯生长发育过程中的生物学功能。主要研究结果如下:(1)通过生物信息学分析,在马铃薯基因组中共鉴定8个AAP基因,并将马铃薯AAP家族基因分为两个亚群。第一亚群为含有6个微孔转运通道(Pore-lining)的StAAP基因,包括StAAP1、StAAP2、StAAP3、StAAP4、StAAP7、StAAP8;第二亚群为包含7个微孔转运通道的StAAP基因,包括StAAP5、StAAP6。(2)基于PGSC的转录组学数据,对StAAP基因家族成员的表达模式进行分析,初步得出StAAP8基因可能通过调控马铃薯根系中氨基酸的转运,进而影响马铃薯根系细胞的渗透势,从而提高植物对干旱等非生物胁迫的耐受能力。(3)采用RT-PCR方法克隆了StAAP1和StAAP8基因,StAAP1基因全长1446bp;编码481个氨基酸,StAAP8基因全长1467bp,编码488个氨基酸。通过亚细胞定位分析发现StAAP1和StAAP8均定位在细胞膜上。(4)为了研究StAAP1和StAAP8基因在马铃薯中的生物学功能,构建了StAAP1、StAAP8基因过表达载体,用农杆菌介导法进行马铃薯遗传转化,通过抗性筛选、PCR检测等方法对转基因植株进行鉴定,并采用qRT-PCR技术,对转基因马铃薯中StAAP1、StAAP8的表达量进行了检测。(5)对转基因植株的表型进行观察,发现OXStAAP1和OXStAAP8转基因植株的株高与野生型并没有明显的差异,但是其叶片叶面积明显较大。转基因微型薯表型进行分析,发现StAAP1过表达的微型薯的薯型与野生型相比个别有明显的差异,而过表达StAAP8的则没有明显的差异。

Abstract

an ji suan zhuai yun dan bai jie dao zhi wu ti nei ge lei an ji suan de zhuai yun ,dui zhi wu de sheng chang he fa yo zhi guan chong yao 。zhi wu zhong de an ji suan zhuai yun dan bai zhu yao fen wei ATFs(the amino acid transporter family)he APCs(the amino acid polyamine choline transporter)liang ge jia zu ,ji zhong AAPs(amino acid permease)ya jia zu shu yu ATFsjia zu ,dao mu qian wei zhi AAPs(an ji suan tong tou mei )shi zhi wu zhong yan jiu de xiang dui bi jiao qing chu de yi chong an ji suan zhuai yun dan bai 。ben yan jiu ying yong sheng wu xin xi xue fang fa dui ma ling shu AAPji yin jia zu cheng yuan de ji yin jie gou 、dan bai jie gou te zheng yi ji zai ma ling shu zu zhi zhong de biao da mo shi jin hang le fen xi ,gou jian le AAPjia zu dan bai jin hua shu ,bing cong ma ling shu zai pei pin chong Desireezhong ke long de dao le StAAP1he StAAP8liang ge ji yin ,gou jian le StAAP1he StAAP8ji yin guo biao da zai ti ,jin hang ma ling shu wei chuan zhuai hua ,bing fen xi le StAAP1he StAAP8dan bai de ya xi bao ding wei ,chu bu yan jiu StAAP1he StAAP8ji yin zai ma ling shu sheng chang fa yo guo cheng zhong de sheng wu xue gong neng 。zhu yao yan jiu jie guo ru xia :(1)tong guo sheng wu xin xi xue fen xi ,zai ma ling shu ji yin zu zhong gong jian ding 8ge AAPji yin ,bing jiang ma ling shu AAPjia zu ji yin fen wei liang ge ya qun 。di yi ya qun wei han you 6ge wei kong zhuai yun tong dao (Pore-lining)de StAAPji yin ,bao gua StAAP1、StAAP2、StAAP3、StAAP4、StAAP7、StAAP8;di er ya qun wei bao han 7ge wei kong zhuai yun tong dao de StAAPji yin ,bao gua StAAP5、StAAP6。(2)ji yu PGSCde zhuai lu zu xue shu ju ,dui StAAPji yin jia zu cheng yuan de biao da mo shi jin hang fen xi ,chu bu de chu StAAP8ji yin ke neng tong guo diao kong ma ling shu gen ji zhong an ji suan de zhuai yun ,jin er ying xiang ma ling shu gen ji xi bao de shen tou shi ,cong er di gao zhi wu dui gan han deng fei sheng wu xie pai de nai shou neng li 。(3)cai yong RT-PCRfang fa ke long le StAAP1he StAAP8ji yin ,StAAP1ji yin quan chang 1446bp;bian ma 481ge an ji suan ,StAAP8ji yin quan chang 1467bp,bian ma 488ge an ji suan 。tong guo ya xi bao ding wei fen xi fa xian StAAP1he StAAP8jun ding wei zai xi bao mo shang 。(4)wei le yan jiu StAAP1he StAAP8ji yin zai ma ling shu zhong de sheng wu xue gong neng ,gou jian le StAAP1、StAAP8ji yin guo biao da zai ti ,yong nong gan jun jie dao fa jin hang ma ling shu wei chuan zhuai hua ,tong guo kang xing shai shua 、PCRjian ce deng fang fa dui zhuai ji yin zhi zhu jin hang jian ding ,bing cai yong qRT-PCRji shu ,dui zhuai ji yin ma ling shu zhong StAAP1、StAAP8de biao da liang jin hang le jian ce 。(5)dui zhuai ji yin zhi zhu de biao xing jin hang guan cha ,fa xian OXStAAP1he OXStAAP8zhuai ji yin zhi zhu de zhu gao yu ye sheng xing bing mei you ming xian de cha yi ,dan shi ji xie pian xie mian ji ming xian jiao da 。zhuai ji yin wei xing shu biao xing jin hang fen xi ,fa xian StAAP1guo biao da de wei xing shu de shu xing yu ye sheng xing xiang bi ge bie you ming xian de cha yi ,er guo biao da StAAP8de ze mei you ming xian de cha yi 。

论文参考文献

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论文详细介绍

论文作者分别是来自西北农林科技大学的孔娜娜，发表于刊物西北农林科技大学2019-07-11论文，是一篇关于马铃薯论文,遗传转化论文,氨基酸转运论文,西北农林科技大学2019-07-11论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自西北农林科技大学2019-07-11论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。

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