盐酸伊立替康脂质体的研究

论文摘要

盐酸伊立替康（irinotecan hydrochloride,CPT-11）是喜树碱的一个水溶性衍生物,因其较好的抗肿瘤活性和较低的毒性被广泛关注。CPT-11通过抑制肿瘤细胞中的拓扑异构酶Ⅰ起到抗肿瘤作用。临床前研究显示,盐酸伊立替康具有广泛的抗肿瘤活性。目前,该药已获得FDA的批准,用于治疗对氟脲嘧啶耐药的转移性结直肠癌。但同其它喜树碱类药物一样,其主要缺点为:第一,在生理条件下其结构中的内酯环易发生水解反应转变为羧酸盐形式,从而失去活性。第二,毒副作用较大,主要表现为中性粒细胞减少和迟发性腹泻。本文以增加盐酸伊立替康的疗效,降低其副作用为目的,采用主动载药技术——硫酸铵梯度法制备了CPT-11普通脂质体。为了进一步提高其缓释特性,减少给药次数,又制备了CPT-11多囊脂质体。首先建立了高效液相法测定CPT-11药物含量的方法,测定了CPT-11在不同pH值时的溶解度,并对CPT-11的稳定性进行了考察。采用微柱离心法分离脂质体和游离药物,建立了CPT-11普通脂质体包封率的测定方法。以包封率为评价指标,分别采用被动载药法（包括薄膜分散法、逆向蒸发法、乙醇注入法）与主动载药法——硫酸铵梯度法制备CPT-11普通脂质体。结果采用硫酸铵梯度法制备的CPT-11普通脂质体可获得很高的包封率。并采用了饱和大豆磷脂和不饱和大豆磷脂为膜材,通过单因素考察和正交试验设计优化硫酸铵梯度法的处方工艺,制备了包封率达到80%以上的CPT-11普通脂质体。考察了CPT-11普通脂质体的理化性质,使用透射电镜对采用饱和磷脂和不饱和磷脂为膜材制备的CPT-11脂质体的形态,两种膜材制备的脂质体呈类球型,大小均一。采用饱和磷脂为膜材制备的脂质体（HSPC-L）的体积径为（142±7.8）nm,采用不饱和磷脂为膜材制备的脂质体（HSPC-L）的体积径为（198±10.4）。测得两者的pH值分别为7.06和7.39,包封率分别为（88.4±1.30）和（90.5±0.95）。体外释放试验表明,HSPC-L较SPC-L具有更好的缓释特性。影响因素试验表明,CPT-11普通脂质体在高温和强光的条件下稳定性较差,在4℃条件下保存,CPT-11普通脂质体的理化性质变化较小,性质较稳定。HSPC-L的稳定性优于SPC-L的稳定性。生物安全性试验表明,CPT-11普通脂质体无明显的生物刺激性,SPC-L无溶血反应,HSPC-L在三小时后出现溶血现象,需进一步优化处方。为了增加CPT-11在体内的作用时间,又制备了CPT-11多囊脂质体,并建立了其包封率的测定方法。采用单因素考察优化了多囊脂质体的工艺处方。结果表明,采用最佳工艺处方制备的CPT-11多囊脂质体外观形态较好,包封率为（30.13±2.00）%。从粒度测定结果可知:CPT-11多囊脂质体的粒径为（33.11±13.82）μm。与普通脂质体相比,多囊脂质体的粒径较大,比普通脂质体大一到两个数量级。体外释放试验表明,CPT-11多囊脂质体的持续释药时间可达48小时,具有较好的缓释特性。

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摘要

Abstract

前言

1 盐酸伊立替康研究进展

2 脂质体研究进展

3 主动载药技术的发展

4 梯度法主动载药的机制

5 多囊脂质体研究进展

6 立题依据与主要研究内容

第一章盐酸伊立替康处方前研究及其制剂分析方法的建立

1 仪器与试药

1.1 试药

1.2 仪器

2 方法与结果

2.1 盐酸伊立替康高效液相色谱分析方法的建立

2.1.1 紫外吸收波长的确定

2.1.2 色谱条件

2.1.3 辅料的干扰测定

2.1.4 标准曲线的绘制

2.1.5 最低定量限

2.2 精密度试验

2.3 在不同pH值下表观溶解度的测定

2.4.盐酸伊立替康的稳定性研究

2.4.1 盐酸伊立替康固体状态的稳定性

2.4.2 盐酸伊立替康水溶液的稳定性

2.5 盐酸伊立替康脂质体包封率测定方法的建立

2.5.1 加样回收率

2.5.2 sephadex G-50微型柱的制备

2.5.3 空白脂质体吸收波长的确定

2.5.4 sephadex G-50对空白脂质体吸附作用考察

2.5.5 离心时间的影响

2.5.6 sephadex G-50对盐酸伊立替康吸附作用考察

2.5.7 脂质体包封率测定

3 讨论

3.1 CPT-11的表观溶解度

3.2 CPT-11的稳定性

3.3 CPT-11脂质体包封率测定发法的选择

3.4 CPT-11含量测定方法的选择

4 本章小结

第二章盐酸伊立替康普通脂质体的制备工艺研究

1.试药与仪器

1.1 试药

1.2 仪器

2 方法与结果

2.1 采用被动载药法制备CPT-11普通脂质体

2.1.1 薄膜分散法

2.1.2 乙醇注入法

2.1.3 反相蒸发法

2.2 硫酸铵梯度法制备CPT-11普通脂质体

2.2.1 以非饱和大豆磷脂（SPC）为膜材制备CPT-11脂质体（SPC-L）

2.2.2 以饱和大豆磷脂（HSPC）为膜材制备CPT-11脂质体（HSPC-L）

2.3 硫酸铵梯度法制备过程中不同工艺因素对包封率的影响

2.3.1 孵育温度的影响

2.3.2 孵育时间的影响

2.3.3 药脂比的影响

2.3.4 硫酸铵浓度的影响

2.4 正交试验设计优化处方

2.5 正交实验结果

3 讨论

3.1 制备方法的选择

3.2 粒度减小的方法选择

3.3 灭菌方法的选择

3.4 硫酸铵浓度对脂质体包封率的影响

3.5 孵育温度和孵育时间

4.本章小结

第三章盐酸伊立替康脂质体理化性质和体外释放的研究

1 试药与仪器

1.1 试药

1.2 仪器

2 方法与结果

2.1 显微形态观察

2.2 脂质体的粒度分布

2.3 pH值的测定

2.4 体外释放

2.4.1 标准曲线的绘制

2.4.2 药物释放的回收率

2.4.3 盐酸伊立替康普通脂质体在PBS中的释放

2.4.4 盐酸伊立替普通康脂质体在右旋糖酐中的释放

3 讨论

3.1 盐酸伊立替康普通脂质体的显微形态

3.2 盐酸伊立替康普通脂质体的粒度分布

3.3 盐酸伊立替康普通脂质体的体外释放

4 本章小结

第四章盐酸伊立替康脂质体的稳定性和安全性考察

1 试药与仪器

1.1 试药

1.2 仪器

1.3 实验动物

2 方法与结果

2.1.CPT-11普通脂质体的稳定性考察

2.1.1 化学稳定性

2.1.2 物理稳定性

2.1.3 影响因素试验

2.1.4 稳定性试验

2.2 CPT-11普通脂质体的安全性考察

2.2.1 刺激性试验

2.2.2 溶血性试验

3.讨论

3.1 CPT-11普通脂质体的稳定性

3.2 CPT-11普通脂质体的安全性

4 本章小结

第五章盐酸伊立替康多囊脂质体的制备工艺及制剂学性质研究

1 仪器与试药

1.1 试药

1.2 仪器

2 方法与结果

2.1 CPT-11多囊脂质体的制备工艺

2.2 CPT-11多囊脂质体包封率的测定方法

2.3 CPT-11多囊脂质体的处方筛选

2.3.1 脂药比对CPT-11多囊脂质体包封率的影响

2.3.2 胆固醇用量对CPT-11多囊脂质体包封率的影响

2.3.3 三油酸甘油脂（TO）对CPT-11多囊脂质体包封率的影响

2.3.4 磷脂酰丝氨酸（PS）对CPT-11多囊脂质体包封率的影响

2.3.5 外水相pH值的影响

2.3.6 内水相添加介质的影响

2.4 制备工艺的选择

2.4.1 搅拌速度和时间

2.4.2 温度

2.4.3 氮气除有机溶剂的速度

2.5 CPT-11多囊脂质体的制剂学性质的研究

2.5.1 显微形态观察

2.5.2 脂质体的粒度分布

2.5.3 CPT-11多囊脂质体的体外释放

3 讨论

3.1 多囊脂质体的制备

3.2 多囊脂质体的形态和粒度

3.3 多囊脂质体的体外释放

4 本章小结

全文结论

参考文献

致谢

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