论文摘要
生物活性多糖是目前研究广泛的一种生物反应调节剂。由于具有良好的免疫调节及抗肿瘤能力,一些从真菌中提取的多糖已经开发成免疫增强及抗肿瘤药物应用于临床。本实验室分离得到一株拟康氏木霉（Trichoderma pseudokoning ii SDTP1）,从其发酵液中提取出的胞外多糖成分,经过前期试验证实,对多种植物病原菌有较强的拮抗作用；能促进小鼠脾淋巴细胞的体外增殖,同时还能提高巨噬细胞的吞噬功能及其产NO的产量。本实验室进一步从拟康氏木霉胞外多糖中分离纯化到一种均一多糖（TPS1-1）,分子量为31930 Da,单糖组成及摩尔比为鼠李糖：木糖：果糖：甘露糖：葡萄糖：半乳糖=16.2：14.4：1：25.8：23.6：48.1。通过小鼠体外细胞试验及体内动物模型实验,研究了其对免疫细胞以及正常小鼠和免疫低下模型小鼠免疫功能的影响。1.体外实验中,用MTT法和ELISA法分别研究了TPS1-1直接及协同有丝分裂源ConA或LPS对小鼠脾淋巴细胞的增殖及分泌IL-2的影响；分别用中性红比色法、pNPP法和Griess试剂法测定了TPS1-1对腹腔巨噬细胞吞噬功能、酸性磷酸酶的含量及NO含量的影响。结果表明,TPS1-1单独作用时,在25-400μg/mL浓度范围内均能显著刺激小鼠脾淋巴细胞增殖,呈剂量依赖性；在6.25-400μg/mL范围内,TPS1-1可协同ConA或LPS刺激小鼠脾淋巴细胞增殖,均达到极显著性差异；TPS1-1可提高小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2,在100μg/mL时多糖处理组的分泌量与对照组相比提高了140.0%。TPS1-1可显著促进巨噬细胞的吞噬作用,200μg/mL多糖处理组与对照相比,吞噬活性提高了14.0%；在25-800μg/mL范围内TPS1-1对巨噬细胞NO产生量有显著提高；6.25-400μg/mL范围内TPS1-1均能极显著地增加巨噬细胞酸性磷酸酶的活性,400μg/mL处理组与对照组相比,提高了137.0%。这些结果表明TPS1-1能激发巨噬细胞和脾淋巴细胞的活性,对免疫细胞具有良好的刺激作用。2.体内实验中,研究了TPS1-1对正常小鼠及免疫低下模型小鼠免疫功能的影响。利用可损伤免疫器官,抑制体液免疫及细胞免疫,导致小鼠免疫缺陷的环磷酰胺构建免疫低下小鼠动物模型。本实验中,模型鼠特异性细胞免疫、脏器指数、细胞因子分泌、T淋巴细胞增殖、耐力等指标均低于正常小鼠,说明造模成功。结果表明,50、100、200mg/kg/day的TPS1-1灌胃处理7天,显著提高了正常鼠血清中IL-2及TNF-a含量,与对照相比,分别平均提高16.0%和17.0%；增加了模型小鼠血清中IL-2及TNF-a的含量,与阴性对照组相比,最高分别提高10.0%和32.5%；TPS1-1能显著提高正常小鼠及免疫低下小鼠迟发型变态反应的足趾增厚度,与对照相比,最高增幅分别达到97.0%和350.0%；TPS1-1能够延长环磷酰胺致免疫低下模型小鼠游泳时间,对其脾淋巴细胞增殖和脏器指数均有良好的提高和促进作用。以上结果表明,TPS1-1对正常小鼠及免疫低下模型小鼠的体液免疫及细胞免疫均有良好的促进作用。本研究证明,拟康氏木霉胞外多糖TPS1-1是-种良好的免疫调节剂,在增强小鼠体液免疫、细胞免疫,或者特异性免疫和非特异性免疫方面,均有良好的表现。它很可能具有良好的抗肿瘤作用,是一种潜在的生物反应调节剂。