PLGA-VCR靶向缓释微球体内毒性及抗肿瘤靶向性研究

论文摘要

目的检测硫酸长春新碱（Vincristine Sulfate, VCR）与聚乳酸乙醇酸共聚物（Polylactic acid-polyglycolic acid copolymer, PLGA）形成的高靶向缓释微球（PLGA-VCR）经不同给药方式对Wistar大鼠的半数致死量（median lethal dose,LD50）,测定PLGA-VCR的血浆蛋白结合率并评价其抗肿瘤靶向性,为PLGA-VCR的药代动力学和药效学研究提供剂量参数,为该高靶向缓释微球的临床研究奠定基础。方法首先将Wistar大鼠随机分为三组,采用改良寇氏法对VCR与PLGA-VCR进行不同给药方式的LD50检测,对结果进行对比分析；然后采用平衡透析法测定PLGA-VCR在Wistar大鼠血浆中的蛋白结合率,利用液-液萃取法提取药物,高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）和液质联用（Liquid Chromatography -Mass Spectrometry, LC-MS）测定药物浓度；最后将BALB/c裸鼠随机分为两组,建立肝癌异位肿瘤模型,采用LC- MS对PLGA-VCR和VCR的抗肿瘤靶向性进行评价和对比分析。结果①临床注射用VCR对Wistar大鼠尾静脉注射的LD50为1.48mg·kg-1,95%可信区间（95%confidence interval,95%CI）为1.36～1.61mg-kg-1 PLGA-VCR对Wistar大鼠尾静脉注射的LD50为3.83mg·kg-1,95%CI为2.86-5.13mg·kg-1; PLGA-VCR对Wistar大鼠腹腔注射的LD50为4.33mg·kg-1,95%CI为3.49-5.38mg·kg-1。②经HPLC检测PLGA-VCR的血浆蛋白结合率在120h时达到最好平衡点,质量浓度为2.5、5.0、10.0、20.0、40.0和80.0μg-ml-1的PLGA-VCR,血浆蛋白结合率分别为35.91%、40.01%、35.79%、32.55%、39.24%和41.34%;经LC-MS检测PLGA-VCR的血浆蛋白结合率同样在120h时达到最好平衡点,质量浓度为10.0、20.0、40.0、80.0、160.0 ng·ml-1的PLGA-VCR,血浆蛋白结合率分别为20.70%、27.33%、29.70%、39.28%、42.93%。③相对于临床注射用VCR, PLGA-VCR在心、肺、肝、肾、脾、脑、胃肠道、体脂、性腺、骨骼肌和肝癌肿瘤组织中的相对摄取率分别为3.8、4.5、6.8、4.9、4.8、5.9、6.8、6.3、6.9、6.1、5.7；峰浓度比分别为1.9、1.7、1.8、1.7、1.8、1.7、2.1、1.6、1.8、2.3、1.2：相对于心、肺、肝、肾、脾、脑、胃肠道、体脂、性腺、骨骼肌中的药物靶向性,PLGA-VCR在肝癌肿瘤组织中的靶向效率分别为1.2、1.0、0.7、1.7、0.8、2.0、0.8、2.1、3.0、1.1, VCR在肝癌肿瘤组织中的靶向效率分别为0.8、0.8、0.8、1.5、0.7、2.1、0.9、2.3、3.7、1.2。结论PLGA-VCR具有较好的缓释作用,它可以降低药物突释引起的急性毒性反应,同时,因为释药过程延长使其给药间隔时间相应延长,降低了连续多次给药出现慢性毒性反应的风险；PLGA-VCR中的高分子材料降解缓慢,故内部包裹药物可长期释放,同时,由于该制剂吸附和包裹药物的释放速率不同,导致血浆蛋白结合率在初期具有较大的波动性,但随着时间的延长,血浆蛋白结合率仍可达到稳定水平,研究发现PLGA-VCR的血浆蛋白结合率在2.5～80.0μg-ml-1范围内没有浓度依赖性,而在10.0～160.0ng-ml-1范围内存在浓度依赖性；和临床注射用VCR相比,PLGA-VCR具有较好的相对摄取率和较高的峰浓度比,充分说明PLGA-VCR比VCR具有更高的组织器官靶向性和更好的改变药物体内分布的效果,但是PLGA-VCR和VCR在肝癌肿瘤组织中的靶向效率没有显著性差异。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 实验动物
• 1.1.2 主要试剂
• 1.1.3 溶液配置
• 1.1.4 耗材
• 1.1.5 主要仪器和设备
• 1.2 LD50检测方法
• 1.2.1 LD0和LD100检测
• 1.2.2 LD50检测
• 1.2.3 LD50统计方法
• 1.3 血浆蛋白结合率检测方法
• 1.3.1 透析袋的处理
• 1.3.2 血浆样本提取及处理
• 1.3.3 HPLC检测方法学的建立
• 1.3.4 专属性试验
• 1.3.5 标准曲线的制备
• 1.3.6 精密度和回收率测定
• 1.3.7 大鼠血浆蛋白结合率测定
• 1.3.8 LC-MS检测方法学的建立
• 1.3.9 专属性试验
• 1.3.10 标准曲线的制备
• 1.3.11 精密度和回收率测定
• 1.3.12 大鼠血浆蛋白结合率测定
• 1.3.13 统计学方法
• 1.4 PLGA-VCR抗肿瘤靶向性检测方法
• 1.4.1 细胞培养
• 1.4.2 肝癌异位肿瘤模型的建立
• 1.4.3 靶向性评价
• 1.4.4 统计学方法
• 第二章 结果
• 2.1 LD50检测结果
• 2.1.1 PLGA-VCR和VCR的LD0及LD100
• 2.1.2 PLGA-VCR和VCR的LD50
• 2.1.3 PLGA-VCR和VCR的毒性反应
• 2.2 PLGA-VCR的血浆蛋白结合率检测结果
• 2.2.1 HPLC检测PLGA-VCR的血浆蛋白结合率
• 2.2.2 LC-MS检测PLGA-VCR的血浆蛋白结合率
• 2.3 PLGA-VCR和VCR的抗肿瘤靶向性结果
• 2.3.1 肿瘤细胞的培养
• 2.3.2 肝癌异位肿瘤模型的建立
• 2.3.3 PLGA-VCR和VCR的抗肿瘤靶向性评价
• 第三章 结论
• 3.1 主要结论
• 3.1.1 PLGA-VCR和VCR的LD50
• 3.1.2 PLGA-VCR的血浆蛋白结合率
• 3.1.3 PLGA-VCR的抗肿瘤靶向性
• 3.2 研究展望
• 综述
• 参考文献
• 附录
• 在学期间的研究成果
• 致谢