SEZ-6基因在脑组织的表达分布及其功能初探

论文题目: SEZ-6基因在脑组织的表达分布及其功能初探

论文类型: 硕士论文

论文专业: 基础医学

作者: 袁史波

导师: 张军

关键词: 小脑,癫痫,大脑

文献来源: 同济大学

发表年度: 2005

论文摘要: 癫痫引发的抽搐是由大脑皮质神经元的阵发性放电所致。惊厥诱发剂戊四氮(Pentylenetetrazol，PTZ)诱发的抽搐是一种很好的阵发性放电模型。此前有人报道在大鼠中发现的一种PTZ所诱发的抽搐上调表达基因SEZ-6(Seizure-related genes6，SEZ-6)编码一种膜蛋白，它具有补体C3b／C4b结合的短的一致性重复片段(Short consensus repeat，SCR)，两个类似于CUB(Complement subcomponents Clr／Cls，Uegf，Bmpl)的重复序列，一个跨膜区以及C端短的胞内区，这样的特殊结构提示它可能在细胞之间的识别和膜受体信号传导方面发挥作用。研究SEZ-6基因的功能及其功能的丧失与癫痫之间的关系，对研究癫痫的发病机制有重要的意义。我们首先利用免疫组化技术证实了SEZ-6在小鼠小脑组织中有表达。在不同发育时期的小鼠小脑组织中的表达研究发现，SEZ-6随发育时间的推移呈有规律的表达。SEZ-6在胚胎期有较高量的表达，特别是胚胎18天(E18)表达量最高，出生后明显下降，然后趋于平稳。这与已经报道的SEZ-6在大鼠大脑组织的Northern杂交的结果相似；也与本实验小组邵志华的WESTERN结果吻合。利用脂质体转染技术，将可表达小鼠SEZ-6基因mRNA对应的双链DNA的质粒载体转入原代培养的小鼠浦肯野神经元和非浦肯野神经元，然后观察干扰后小脑神经元的凋亡现象，进一步探讨SEZ-6基因的功能。RNA干扰实验表明，RNA干扰后的小鼠小脑神经元出现明显的凋亡现象。由此可见SEZ-6与小脑神经元的生长有一定的关系。用原位杂交技术，观察和比较SEZ-6 mRNA在大鼠大脑组织中的细胞学分布特征；观察到了大鼠额叶、顶叶、颞叶皮层内SEZ-6 mRNA特异性分布于神经元内，在胶质细胞中没检测到SEZ-6 mRNA阳性信号。以上结果均提示SEZ-6在鼠脑的神经元发育过程中起到一定的作用。

论文目录:

摘要

ABSTRACT

第1章前言

第2章材料和方法

2.1 技术路线

2.2 材料

2.2.1 不同时期的脑组织

2.2.2 多肽片段的合成

2.2.3 动物实验

2.2.4 ELASA相关材料及试剂

2.2.5 细胞培养的材料和试剂

2.2.6 免疫组化试剂

2.2.7 菌种及质粒载体

2.2.8 RNA干扰基因片段

2.2.9 RNA干扰载体测序引物

2.2.10 探针

2.2.11 组织原位杂交

2.2.12 LB培养基

2.2.13 凋亡试剂及转染试剂

2.2.14 生物信息途径

2.3 主要仪器设备

2.4 实验方法

2.4.1 抗体的备制

2.4.2 浦肯野神经元的培养

2.4.3 免疫组化分析

2.4.4 质粒构建和抽提

2.4.5 小脑神经元的转染,干扰和凋亡检测

2.4.6 原位杂交

第3章结果

3.1 抗SEZ-6抗体滴度的测定

3.2 免疫组化结果

3.3 小脑神经元的转染,干扰和凋亡

3.4 原位杂交

第4章讨论

4.1 不同发育时期小鼠小脑组织中SEZ-6的表达

4.2 小脑神经元的转染

4.3 SEZ-6基因沉默后对小脑神经元的影响

4.4 SEZ-6基因在大脑组织中的分布表达

4.5 SEZ-6基因也癫痫的关系

第5章结论

参考文献

附录一:文献综述

附录二:在读期间发表的学术论文和研究成果

致谢

发布时间: 2007-12-28

参考文献

[1].小脑梗塞50例临床特征与影像学对比分析[D]. 刘子良.吉林大学2015
[2].HIF-1a与VEGF在小脑血管网织细胞瘤中的表达[D]. 李鹏.河北医科大学2008
[3].小脑延髓裂入路四脑室肿瘤的疗效评估[D]. 张华亮.浙江大学2007

SEZ-6基因在脑组织的表达分布及其功能初探

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