PKB，PTEN和c-kit在神经纤维瘤中的表达及意义

论文摘要

背景与目的孤立性神经纤维瘤（solitary neurofibroma）即一般所说的神经纤维瘤，是指不具有神经纤维瘤病其它表现的局部单发的神经纤维瘤，少部分患者也可以有一个以上的神经纤维瘤。孤立性神经纤维瘤是由神经鞘细胞和纤维母细胞两种主要成分及少量轴索、神经束衣细胞组成的良性肿瘤。目前其具体发病机制尚不清楚。Ⅰ型神经纤维瘤病（neurofibromatosis type 1，NF1）是临床常见的神经系统常染色体遗传疾病。1987年Barker等发现了该病致病基因NF1基因，并定位于17q11.2。NF1基因主要通过其编码产物神经纤维素的GAP活性对p21ras进行负性调节，阻止ras传出的有丝分裂信号，从而有效控制着细胞的过度增生。目前认为NF1基因突变导致神经纤维素功能减弱或缺失从而使ras-GTP水平增高，干扰了ras信号通路的正常传导，可能就是NF1发病的主要机制，但其详细机制还不完全清楚。随着分子生物学的飞速发展，对细胞内信号转导途径的探讨成为肿瘤病因学研究的重要内容。磷脂酰肌醇-3激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）／蛋白激酶B（protein kinase B，PKB）信号途径是进入20世纪80年代以来，在肿瘤发病机制的研究中逐渐成为热点的一条新的信号转导途径，在临床许多恶性肿瘤中都发现其中的因子异常表达。PKB作为该途径直接的靶蛋白，活化后为磷酸化状态（phosphorylated PKB，p-PKB），具有促进细胞增殖、对抗细胞凋亡、促进糖原和蛋白合成、调节细胞周期等多种生物学功能。与张力蛋白同源的第十染色体同源丢失性磷酸酶基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN）是一种肿瘤抑制基因，其功能缺失与肿瘤形成有关，它能使PI3K的脂类产物脱磷酸，下调由PI3K／PKB通路控制的细胞生长与存活。原癌基因蛋白c-kit（proto-oncogeng protein c-kit）是干细胞因子（stem cell factor，SCF）的受体，其与配体之间的特异性结合可直接快速激活PI3K，上调PI3K／PKB通路的信号传导。为进一步了解NF1与孤立性神经纤维瘤形成的分子机制，我们采用免疫组化方法对NF1与孤立性神经纤维瘤的皮肤神经纤维瘤组织中p-PKB，PTEN和c-kit的表达水平进行检测并分析其相关性，和正常皮肤组织相对照，以期为进一步揭示p-PKB，PTEN和c-kit对NF1和孤立性神经纤维瘤形成的影响，和深入研究NF1和孤立性神经纤维瘤发生、发展的分子机制提供有价值的实验资料，同时也为神经纤维瘤的临床生物治疗提供新的靶点。材料和方法1．对所收集NF1和孤立性神经纤维瘤组织蜡块做常规HE染色。2．应用免疫组化S-P法检测26例NF1组织标本、20例孤立性神经纤维瘤组织标本和11例正常皮肤组织标本中p-PKB，PTEN和c-kit的表达，并分析它们在不同组织之间表达的差异及相关性。3．统计学处理：所有数据经SPSS13.0软件包进行统计学分析。阳性率的比较采用χ2检验及Fisher’s精确概率法，相关性分析采用Spearman等级相关分析，以α=0.05为检验水准（卡方分割后α=0.0167），以P＜0.05为有统计学意义。结果1．HE染色结果：NF1组和孤立性神经纤维瘤组的神经纤维瘤组织染色均可见梭形细胞呈条索状或漩涡状排列，两组的细胞组成、细胞形态结构和大体增生程度无明显区别。证实本实验收集的蜡块为NF1和孤立性神经纤维瘤组织。2．p-PKB阳性细胞主要定位于肿瘤细胞胞浆，偶见胞核着色。p-PKB在正常皮肤组织中的表达低，阳性率为9.09％（1／11），在孤立性神经纤维瘤和NF1组织中表达高，阳性率分别为55.00％（11／20）和53.85％（14／26）。正常皮肤组织与NF1组织之间的表达差异有统计学意义，P＜0.0167。正常皮肤组织与孤立性神经纤维瘤组织之间的表达差异有统计学意义，P＜0.0167。孤立性神经纤维瘤和NF1组织之间的表达差异无统计学意义，P＞0.0167。3．PTEN阳性细胞主要定位于细胞胞浆，少部分定位于胞核。PTEN在正常皮肤组织中表达阳性率较高，为100％（11／11），在孤立性神经纤维瘤和NF1组织表达阳性率下降，分别为40.00％（8／20）和42.31％（11／26）。正常皮肤组织与NF1组织之间的表达差异有统计学意义，P＜0.0167。正常皮肤组织与孤立性神经纤维瘤组织之间的表达差异有统计学意义，P＜0.0167。孤立性神经纤维瘤和NF1组织之间的表达差异无统计学意义，P＞0.0167。4．c-kit阳性细胞主要定位于肿瘤细胞胞浆，少部分可见胞膜着色。c-kit在正常皮肤组织中的表达较低，阳性率为9.90％（1／11），在孤立性神经纤维瘤和NF1组织中表达较高，阳性率分别为60.00％（12／20）和65.38％（17／26）。正常皮肤组织与NF1组织之间的表达差异有统计学意义，P＜0.0167。正常皮肤组织与孤立性神经纤维瘤组织之间的表达差异有统计学意义，P＜0.0167。孤立性神经纤维瘤和NF1组织之间的表达差异无统计学意义，P＞0.0167。5．在NF1组织中c-kit与p-PKB表达呈正相关，r=0.462，P＜0.05；PTEN与p-PKB表达呈负相关，r=-0.456，P＜0.05。在孤立性神经纤维瘤组织中c-kit与p-PKB表达呈正相关，r=0.698，P＜0.05；PTEN与p-PKB表达呈负相关，r=-0.492，P＜0.05。结论1．p-PKB蛋白在正常皮肤组织中低表达，在NF1和孤立性神经纤维瘤组织中表达升高，提示PKB的活性增强，上调由PI3K／PKB通路控制的细胞生长和凋亡，细胞不受限制的大量增殖，可能参与NF1和孤立性神经纤维瘤的形成。2．PTEN蛋白在正常皮肤组织中高表达，在NF1和孤立性神经纤维瘤组织中表达降低，提示PTEN蛋白的异常可能使其抑制肿瘤的作用缺失，增强PKB及其下游激酶的活性，促进细胞增殖和抑制凋亡，与NF1和孤立性神经纤维瘤的形成有关。3．c-kit蛋白在正常皮肤组织中低表达，在NF1和孤立性神经纤维瘤组织中高表达，提示c-kit蛋白的异常可能影响NF1和孤立性神经纤维瘤的形成。4．在NF1和孤立性神经纤维瘤组织中，p-PKB蛋白和c-kit蛋白表达呈正相关，p-PKB蛋白和PTEN蛋白表达呈负相关，提示在NF1和孤立性神经纤维瘤形成过程中p-PKB蛋白、PTEN蛋白和c-kit蛋白有协同作用，伴随PTEN抑制效应的减弱和c-kit阳性表达的增强，p-PKB活性上调，三者共同影响NF1和孤立性神经纤维瘤的形成。5．p-PKB，PTEN和c-kit蛋白在NF1和孤立性神经纤维瘤组织中的表达大致相同，提示p-PKB，PTEN和c-kit可能与二者的发生无关，而与二者的发展、形成有关，细胞内c-kit和PI3K／PKB信号转导异常及PTEN的功能抑制导致的细胞生长、凋亡异常可能是二者肿瘤发展过程中的共同之处。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 论文部分 PKB,PTEN和c-kit在神经纤维瘤中的表达及意义
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 附图
• 附录
• 参考文献
• 综述部分 c-kit,PI3K/PKB通路与Ⅰ型神经纤维瘤病的关系
• 参考文献
• 后记
• 缩略语表
• 致谢