(莱芜市妇幼保健院山东莱芜271100)
【摘要】目的:探讨多囊卵巢综合症与MTHFR、MTRR、HCY的相关性,为改善PCOS妊娠结局提供更多帮助。方法:收集就诊于我院生殖科的67例PCOS患者与37例健康女性的口腔黏膜上皮脱落细胞,利用荧光定量PCR技术检测MTHFR基因C677T、A1298C和MTRRA66G位点的单核苷酸多态性(SNPs),同时进行红细胞叶酸和HCY检测,PCOS组和对照组进行比较。结果:基因型和基因频率在MTHFRC667T和1298C位置,两组比较均无统计学意义(P>0.05),而PCOS组MTRRA66G位置的AA、AG、GG基因型与基因频率分别与对照组比较均有统计学意义(P<0.05),红细胞叶酸含量两组比较有统计学意义(P<0.05),而HCY含量比较无统计学意义(P>0.05)。通过对PCOS组进行组内不同基因组型的比较,其结果显示PCOS组红细胞叶酸含量与MTHFRC667T呈负相关,HCY含量与MTRRA66G呈正相关。结论:在本地区人群中,MTHFRC677T、A1298C基因多态性与PCOS的发生尚未发现有明确相关性,而MTRRA66G有相关性。
【关键词】多囊卵巢综合症;基因多态性;MTHFR基因;MTRR基因;红细胞叶酸;同型半胱氨酸
【中图分类号】R711.75【文献标识码】A【文章编号】1007-8231(2018)24-0157-02
多囊卵巢综合征(PCOS)是青春期及育龄妇女最常见的高度异质性、内分泌代谢紊乱性疾病,其发病因素尚未完全明确,但大量的研究显示,该病可能是多种环境因素和多个基因异常共同作用的结果。在育龄妇女中PCOS的发病率大约为5%~10%,在不孕女性患者中为20%~30%,是无排卵性不孕的主要原因。其具有妊娠率低,流产率高且早期自然流产率可达到30%~50%,比普通孕妇增加3~4倍,妊娠后易并发妊娠期糖尿病、妊娠高血压等产科并发症,严重影响妊娠结局。有研究[1]表明,MTHFR基因位点C677T、A1298C与MTRR基因位点A66G的多态性会造成MTHFR与MTRR的酶活性降低,导致叶酸代谢障碍,会使同型半胱氨酸(Hcy)水平升高。高Hcy与复发性流产、妊娠期高血压等孕期疾病以及心脑血管疾病密切相关。因此本研究旨在判断MTHFR和MTRR基因多态性与PCOS的关系,以进一步了解PCOS的发病机理,为该地区人群预防出生缺陷制定针对性的干预研究提供科学依据。
1.对象与方法
1.1研究对象
选择来我院生殖健康科就诊的PCOS患者,年龄21~40岁,诊断标准依据中华医学会内分泌组专家共识建议的诊断标准,一般情况下只要满足下述3个方面中的2点也就可以诊断为PCOS。(1)诊断结果为偶发排卵或者无排卵等情况存在。(2)患者诊断为雄激素过多症。(3)卵巢多囊样改变(PCO):应用B超的模式来对患者进行诊断,发现一侧卵巢直径处于2~8mm,卵泡数量大于或等于12个,卵巢总体积增大幅度超过了10ml。此外在排除患者患有肾上腺皮质增生,库欣综合征,雄激素分泌肿瘤等疾病之后也就可以确诊为PCOS。选择同期就诊于我院生殖健康科的非多囊卵巢育龄期欲生育妇女,年龄23~40岁。
1.2研究方法
1.2.1标本DNA采集在进行DNA标本采集过程中主要是对受检者的口腔黏膜上皮脱落细胞进行有采集,其由专业人员完成采集工作,并在对样本进行适当处理之后送到相应的生物公司进行分析。
1.2.2基因型检测采用Taqman-MGB技术,使用TaqmanMGB探针的realtimePCR反应,检测MTHFRC677T、A1298C和MTRRA66G的基因多态性。检测过程中所使用的仪器和试剂均购买自美国ABI公司。反应条件为95℃预热10min;92℃变性15s,60℃延伸1min,20个循环;89℃变性15s,60℃延伸1min30s;30个循环。反应完成后,用ABI7900型荧光定量PCR仪读取样品的终点荧光,利用分析软件确定各个样本的基因分型结果。
1.3统计学方法
统计学方法采用SPSS17.0软件进行统计学分析,应用HaploView4.2软件进行单核甘酸多态性的Hardy-Wein-berg平衡、连锁不平衡水平和单倍型结构分析。计量资料以(x-±s)表示,比较采用t检验和F检验;计数资料采用例(%)表示,比较采用χ2检验。P<0.05有统计学意义。
2.结果
2.1PCOS组中MTHFRC677T位置的CC、CT、TT基因型分别是10.45%、37.31%和52.24%,C和T基因频率分别是29.10%和70.90%;A1298C位置的AA、AC基因型分别是83.58%和16.42%,A和C基因频率分别是91.79%和8.21%;与正常对照组比较PCOS组基因型和基因频率均无统计学意义(P>0.05)。而PCOS组MTRRA66G位置的AA、AG和GG基因型分别是73.13%、26.87%和0.00%,A和G基因频率分别是86.57%和13.43%,此位点基因型和基因频率与对照组比较PCOS组均有统计学意义(P<0.05),结果见表1。
2.2PCOS组和对照组红细胞叶酸含量、同型半胱氨酸含量的比较,结果见表2。
2.3PCOS组中MTHFRC667T、MTHFRA1298C、MTRRA66G基因位点与红细胞叶酸含量和同型半胱氨酸含量的相关性分析,结果见表3。
3.讨论
PCOS的发病机制不明确,主要涉及到环境、遗传和心理等多种因素,来自荷兰的研究显示同卵双胞胎PCOS的发病率明显高于异卵双胞胎,这表明PCOS具有明显的遗传倾向性[2]。近几年的研究[4-5]表明PCOS是基因相关性疾病,可能是相关致病基因和环境因素(如营养、饮食平衡失调等)共同作用的结果。基因与PCOS的关系近年来已有大量报道[3],但是对MTHFR和MTRR基因多态性的研究却比较少。
我们通过对PCOS组及正常人群进行基因型及基因频率对比发现均无统计学意义(P>0.05)。而PCOS组MTRRA66G位置的AA、AG和GG基因型分别是73.13%、26.87%和0.00%,A和G基因频率分别是86.57%和13.43%,此位点基因型和基因频率与对照组比较均P<0.05.差异有统计学意义。Fu等[6]对欧洲和亚洲的PCOS患者进行的研究结果显示,MTHFRC677T基因的变异仅在欧洲的POS患者中有统计学意义,在亚洲的PCOS患者中则无统计学意义。而Lee等[7]认为,MTHFR基因的C677T变异在亚洲和欧洲的PCOS患者中都没有相关性。因为MTHFR的基因多态性在不同的人群和人种中变异很大,所以研究结论都应建立在与本地区的正常对照人群基础上,而不是一概而论。
MTHFR是叶酸代谢过程中的关键酶,在体内将5,10-亚甲基四氢叶酸催化还原成5-甲基四氢叶酸[8],并促使同型半胱氨酸甲基化生成甲硫氨酸,发挥调节体内同型半胱氨酸水平的作用[9-10]。
本研究结果显示与对照组比较,PCOS组红细胞叶酸含量有差异(P<0.05),有统计学意义,而HCY含量差异无统计学意义(P>0.05)。PCOS组MTHFRC667T、MTHFRA1298C和MTRRA66G基因位点进行组内不同基因组型的比较,其结果显示PCOS红细胞叶酸含量与MTHFRC667T呈负相关,HCY含量与MTRRA66G呈正相关。可以进一步推断,虽然本研究显示MTHFR基因C677T、A1298C位点的多态性与PCOS并无直接关系,但PCOS患者中MTHFR和MTRR基因突变,在一定程度上可影响机体的叶酸和HCY代谢。因此我们仍建议对PCOS患者进行MTHFR和MTRR基因相关位点多态性进行筛查,对于叶酸利用能力较差的人群预防性的增补叶酸,以防止代谢障碍造成胚胎发育异常。
【参考文献】
[1].安妮,张阳,宋沧桑.叶酸代谢相关基因多态性与其个体化补充的研究进展[J].中国药房,2017,28,(17):2444-2445.
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[3]Diamant-KandarakisE,PiperiC.Geneticsofpolycysticovarysyndromesearchingforthewayoutofthelabyrinth[J].HumReprodUpdate,2005,11(6):631-634.
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