论文摘要
2003年底以来人高致病性H5N1禽流感在全世界引起了极大关注。但是由于其高致病性,必须在高等级的BSL-3实验室开展相关工作,这大大影响了其相关研究的开展。流感病毒的血凝素基因（HA）编码的血凝素是产生中和抗体的重要抗原,并在病毒的受体识别和复制中起重要作用。构建包膜蛋白为H5N1禽流感病毒HA蛋白的假病毒（Pseudotyped virus）,由于其只能感染而不能复制的特性,有望安全地用于高致病性H5N1禽流感病毒的诊断等相关研究。本研究的主要目的就是以我国分离的高致病性H5N1禽流感病毒为研究对象,以慢病毒载体为基础,构建包膜蛋白为H5N1禽流感病毒HA蛋白的假病毒,对其生物学特性进行研究,并将其初步应用于H5N1禽流感病毒的血清检测。本研究结果主要包括以下三个方面:1.以慢病毒表达载体pLP为骨架,成功构建了以A/Anhui/1/2005（H5N1）病毒HA及其哺乳动物细胞表达优化基因HA-Opti和A/Vietnam/1194/2004（H5N1）病毒HA基因的真核表达载体pLP-HA-AH1,pLP-HA-AHOpti,pLP-HA-VN1194;间接免疫荧光和免疫组化结果表明三种真核表达载体HA基因在293T细胞中成功地得到表达。2.通过质粒共转染获得包膜蛋白为H5N1禽流感病毒HA蛋白的假病毒;在电子显微镜下观察到病毒粒子的形态结构,Western Blot证明HA蛋白存在于假病毒颗粒中。3.假病毒的生物学特性研究3.1假病毒具有感染性,均能感染293T、MDCK和BEAS-2B三种细胞,并且均具有血凝活性3.2不同来源的HA基因对假病毒的包装效率有影响,来自A/Vietnam/1194/2004（H5N1）病毒HA基因的假病毒包装效率较来自A/Anhui/1/2005（H5N1）病毒HA基因的假病毒包装效率高,但是对HA基因进行优化并不能明显提高其假病毒的包装效率。3.3分别用野生型活病毒和对应的假病毒对不同血清进行微量中和实验,结果表明两种病毒的检测结果具有很好的相关性（r=0.8882）。说明构建的假病毒可以应用于微量中和实验,既可用于高致病性H5N1禽流感的血清学诊断,也可应用于疫苗免疫效果的评价。本研究成功构建了高致病性禽流感H5N1禽流感病毒HA蛋白修饰的假病毒,为高致病性H5N1禽流感的血清学检测提供了一种更为安全的替代方法,为不具备BSL-3实验室条件的实验室开展血清学检测工作提供了技术手段。
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