论文摘要
目的:乙型肝炎病毒（HBV）是一种严重危害人类健康的致病因子。在我国,它是导致肝炎、肝硬化、肝细胞癌的主要原因。HBV 属嗜肝DNA 病毒,其基因组为3.2kb 部分双链的环状DNA。HBV 基因组的功能单位十分密集,高度压缩,重复利用。HBV 核心启动子（HBV Core promoter,CP）在HBV 的转录和复制上起重要作用,指导前基因组mRNA 和前核心mRNA 转录。由于病毒基因的表达与调控是研究病毒复制的核心问题,所以本文旨在通过研究与HBV CP 结合的肝细胞特异性蛋白质因子,进一步了解HBV CP 在病毒致病过程中的作用。方法:根据文献报道设计上下游引物,采用聚合酶链反应（Polymerase chain reaction,PCR）技术克隆了HBV CP 的基因片段,将其与氯霉素乙酰转移酶(Chloramphenicol acetyltransfe -rase,CAT 报告基因载体连接,构建了重组报告基因载体pCAT-CP,转染人肝癌细胞系HepG2,同时转染实验室保存的不同的HBV CP 变异株, 用酶联免疫吸附实验（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法检测氯霉素乙酰转移酶的表达,验证其活性。以此结论为基础,我们应用噬菌体展示技术筛选HBV CP结合蛋白基因,以HBV CP PCR产物作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA 文库进行4 轮“吸附-洗脱-扩增”筛选过程,将第4 轮阳性噬斑裂解液
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