肺癌A549细胞上皮—间质转化及其对microRNAs表达影响的研究

论文摘要

背景和目的:在我国,肺癌已成为首位恶性肿瘤死亡原因,肺癌的侵袭转移是术后复发、患者死亡的主要原因;细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transitions,EMT）是在特殊诱导因子的作用下,细胞由上皮型转变成间质型的过程,很多研究表明EMT在肺癌发生发展以及侵袭转移过程中起着重要作用;microRNAs（miRNAs）是一类新近发现的长度约22nt（nucleotide核苷酸）的非编码小RNA分子,通过抑制靶基因mRNA翻译或诱导靶基因mRNA降解,在转录后水平调控基因表达,已经有研究发现其可调控细胞分化、细胞增殖和肿瘤发生发展及侵袭转移等。本研究旨在探讨肺癌A549细胞上皮-间质转化（EMT）及其对microRNAs（miRNAs）表达的影响,为研究肺癌发生发展及侵袭转移的分子机制提供新思路。方法:本研究采用不同浓度的TGF-β1诱导肺癌A549细胞发生EMT;用相差显微镜观察A549细胞诱导前后的形态学变化;Western blot验证EMT相关标记蛋白表达变化;MicroRNA（miRNA）芯片技术检测EMT前后miRNAs表达变化;荧光定量RT-PCT验证芯片结果的可靠性;统计学方法:数据采用SPSS16.0统计学软件进行处理,所有的数据以均数±标准差表示,采用配对设计t检验。结果:肺癌A549细胞经TGF-β1诱导发生EMT后细胞形态拉长,细胞间连接变得疏松;肺癌A549细胞经TGF-β1诱导发生EMT后上皮型标记蛋白E-cadherin表达降低,而间质型标记蛋白Vimentin和Fibronectin表达上调;肺癌A549细胞上皮-间质转化前后MiRNA芯片结果获得51个miRNAs在诱导前后表达差异在2倍以上且有统计学意义（p<0.05）,其中18个miRNAs经诱导后表达上调,33个miRNAs经诱导后表达下调,其中mir-33a和mir-193a-3p的表达经诱导后分别下调了92.8%和86.5%;荧光定量RT-PCR检测mir-33a和mir-193a-3p的表达经诱导后分别下调了73.1%和56.6%。结论:TGF-β1能够诱导肺癌A549细胞发生EMT;EMT可影响肺癌A549细胞中microRNAs的表达;microRNAs可能通过EMT调节肺癌的侵袭转移。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 参考文献
• 第二章 材料和方法
• 1 实验材料、试剂及仪器
• 1、1 实验材料
• 1、2 实验试剂及溶液
• 1、3 实验仪器
• 2 实验方法
• 2、1 肺癌A549 细胞株的培养与诱导
• 2、2 Western Blot
• 2、3 MiRNAs 差异表达谱（miRNAs 芯片）的制作
• 2、4 荧光定量RT-PCR
• 2、5 统计学分析
• 第三章 结果
• 1. TGF-β1 诱导肺癌 A549 细胞发生形态学变化观察
• 2. Western blot 检测肺癌 A549 细胞上皮型标记蛋白与间质型标记蛋白 表达变化
• 3. MiRNA 芯片结果
• 4、总 RNA 提取后质量检测
• 5. 荧光定量 RT-PCR 验证 miRNA 表达谱芯片结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述1
• 参考文献
• 综述2
• 参考文献
• 中英文缩略词表
• 攻读学位期间公开发表的论文
• 攻读硕士学位期间参与的科研项目
• 致谢