论文摘要
目的：体外观察酮缬氨酸钙、酮异亮氨酸钙和消旋羟蛋氨酸钙对人肾系膜细胞的影响。方法：10mM酮缬氨酸钙、酮异亮氨酸钙和消旋羟蛋氨酸钙对HMC细胞干预，采用MTT方法检测干预后对细胞增殖的影响，生化方法检测干预后LDH的变化，免疫组化检测AT1R的表达改变，ELISA方法检测干预后TGF-β1的变化，流式检测干预后细胞周期的改变及凋亡。结果：10mM消旋羟蛋氨酸钙、酮缬氨酸钙、酮异亮氨酸钙干预HMC细胞，细胞出现生长增殖抑制，并且细胞培养上清中LDH含量没有增加，DMSO对照组与酮异亮氨酸钙组和三种药物共同干预组具有统计学差异，p＜0.05，DMSO对照组与其它各实验组之间并无统计学差异，p＞0.05。消旋羟蛋氨酸钙、酮缬氨酸钙、酮异亮氨酸钙干预后HMC细胞AT1R表达较阴性对照组和DMSO组增加，而且，两两组合干预后HMC细胞AT1R表达较单一药物干预未见明显增加，三种药物共同干预后HMC细胞AT1R表达较单一药物干预有明显增加。各实验组TGF-β1的含量较DMSO对照组增加。不论是单一药物干预、两两组合及三种药物共同干预，TGF-β1的含量均较对照组增加，P＜0.01，而且两两药物组合比单一药物TGF-β1的含量升高，三种药物共同干预组TGF-β1的含量升高更加明显。为了进一步探询药物干预后细胞增殖抑制的可能机制，我们还进行了细胞流式分析，结果发现，不同药物干预后HMC细胞均出现了细胞周期G1期阻滞，同时还观测到了细胞凋亡现象。有意思的是，单一药物干预与DMSO对照细胞凋亡率无统计学差异，当两种药物共同作用后，细胞凋亡率较DMSO对照组增加，当使用三种药物共同干预时，细胞凋亡率（18.76±1.02）较DMSO对照组（1.09±0.33）明显增加。结论：10mM的酮缬氨酸钙、酮异亮氨酸钙和消旋羟蛋氨酸钙可以增加AT1R在HMC细胞的表达，诱导TGF-β1的表达增加；同时诱导HMC细胞细胞周期G1阻滞并伴随细胞凋亡。