编码流感病毒核蛋白和基质蛋白DNA疫苗的免疫保护作用研究

论文摘要

DNA疫苗是最近几年从基因治疗研究领域发展起来的一种新型疫苗,它能诱导机体产生持久的体液免疫和细胞免疫应答,具有预防和治疗疾病的作用。流感病毒的核蛋白（nucleoprotein,NP）和基质蛋白（matrix proteinM）具有型特异性,根据NP和M的不同,可以将流感病毒分为A、B、C三型,且它们的核苷酸序列非常保守。本实验将A型流感病毒A/PR/8/34（PR8）（H1N1）的流感病毒核蛋白基因（NP）和基质蛋白基因（M）克隆入真核表达载体中,构建的DNA疫苗用小鼠模型来评估NP和M DNA疫苗的免疫保护作用,期望能在预防流感上取得一些成果。实验中共构建了NP基因（长1497 bp,表达498个氨基酸的蛋白质）、M1基因（长759 bp,表达252个氨基酸的蛋白质）和M2基因（长322 bp,表达97个氨基酸的蛋白质）三个基因的核酸疫苗,疫苗构建鉴定正确后,通过大量提取质粒制备核酸疫苗。并将实验按下述组别进行免疫:1)用NP核酸疫苗对小鼠进行二次、三次、四次、五次、六次免疫;2)用M1、M2核酸疫苗对小鼠分别进行二次、三次、四次、五次、六次免疫（M2只进行了四次、五次和六次免疫）;3)用NP+M1（NP和M1 DNA疫苗混合）核酸疫苗对小鼠分别进行二次、三次、四次、五次、六次免疫。采集每次免疫后小鼠的血清,并在免疫完后一周进行致死量同型流感病毒感染实验,病毒感染后观察小鼠的体重丢失率和存活率,通过小鼠体内抗体滴度,存活率和体重丢失率三个指标来评价疫苗的免疫保护效果。实验结果表明,血清中抗M1 IgG抗体含量随着免疫次数的增加而增高,免疫六次时抗体含量最高,其它免疫组情况也大致相同,随着免疫次数的增长抗体呈上升趋势;在攻毒后的观察期中,体重丢失率M2＞M1＞NP＞（NP+M1）;NP DNA疫苗在六次免疫后能提供50%以上的保护;M1 DNA疫苗在六次免疫后能对小鼠提供约40%保护;M2 DNA疫苗不能为小鼠提供保护;（NP+M1）DNA疫苗免疫的小鼠保护效果最好,只三次免疫就能提供80%以上的保护,它的保护效果要比单独免疫NP和M1好。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1 流感病毒概述
• 2 流感病毒编码的蛋白及研究进展
• 2.1 RNA 聚合酶
• 2.2 血凝素
• 2.3 核蛋白
• 2.4 神经氨酸酶
• 2.5 基质蛋白
• 2.6 非结构蛋白
• 3 流感病毒的流行与危害
• 4 流感的预防与流感疫苗
• 4.1 灭活疫苗
• 4.2 亚单位疫苗
• 4.3 重组活载体疫苗
• 4.4 核酸疫苗
• 第二章 流感病毒核蛋白基因免疫原性的比较研究
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 3 实验结果
• 4 讨论
• 第三章 流感病毒基质蛋白基因免疫原性的比较研究
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 3 实验结果
• 3.1 小鼠接种 M1 DNA 疫苗的保护作用
• 3.2 小鼠接种 M2 DNA 疫苗的保护作用
• 4 讨论
• 第四章 流感病毒核蛋白和基质蛋白 DNA 疫苗混合免疫及各疫苗的比较研究
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 3 实验结果
• 3.1 小鼠接种NP+M1 DNA疫苗的保护作用
• 3.2 小鼠接种 M2、NP、M1和 NP+M1DNA 疫苗后的免疫保护作用比较
• 4 讨论
• 结语
• 参考文献
• 缩写表
• 读研期间文章发表和录用情况
• 致谢