HLA-G表达下降对JEG-3细胞生物学行为的影响

论文摘要

妊娠期高血压疾病是妊娠期特有的多系统、多器官损伤疾病,该病严重危害母婴健康,是孕产妇与围生儿发病及死亡的重要原因之一,但其发病机制并不明确。免疫因素是研究热点。近年来发现人类白细胞抗原G基因与妊娠期高血压疾病发生发展有关联。人类白细胞抗原-G基因（human leukocyte antigen-G,HLA-G）是一种非经典HLA-Ⅰ分子,特异性高表达于绒毛外细胞滋养细胞,人类滋养细胞株JEG-3也有高表达。HLA-G诱导母胎界面的免疫耐受,维持妊娠的正常进行。HLA-G在滋养细胞的异常表达,可能导致病理妊娠如妊娠期高血压疾病等。本课题利用RNA干扰（RNAi）技术抑制滋养细胞株JEG-3中HLA-G的表达,并运用western blot、RT-PCR、MTT、流式细胞检测、Matrigel体外侵袭实验等探讨HLA-G表达下降对JEG-3细胞增殖、凋亡、侵袭的影响。我们的实验结果提示HLA-G表达下降促进JEG-3细胞凋亡,抑制滋养细胞的侵袭和增殖。本课题共分两部分:（1）化学修饰的siRNA体外下调滋养细胞株JEG-3细胞HLA-G的表达;（2） HLA-G表达下降对JEG-3细胞生物学行为的影响。第一部分化学修饰的siRNA体外下调滋养细胞株JEG-3细胞HLA-G的表达目的选定有效抑制滋养细胞株HLA-G表达的siRNA。方法采用人类滋养细胞株JEG-3进行体外培养,应用RNA干扰技术（RNAi）抑制HLA-G表达,RT-PCR法和Western blot测定HLA-G mRNA和蛋白表达水平,确定有效抑制HLA-G表达的siRNA。结果针对HLA-G的3条siRNA均能够明显下调JEG-3细胞中HLA-G mRNA和蛋白的表达,抑制率达到80%—90%。结论应用RNAi技术特异性下调JEG-3细胞系中HLA-G的表达,为进一步研究HLA-G在人类母胎免疫耐受、正常妊娠的维持等方面的作用奠定基础。第二部分HLA-G表达下降对JEG-3细胞生物学行为的影响目的探讨HLA-G对人类滋养细胞株JEG-3生长周期、增殖力和侵袭力的调节作用。方法采用人类滋养细胞株JEG-3进行体外培养。应用RNA干扰技术（siRNA）抑制JEG-3细胞HLA-G的表达,RT-PCR和Western Blot检测HLA-G mRNA和蛋白表达水平。Transwell小室、流式细胞术、MTT法分别检测HLA-G表达下降后JEG-3细胞侵袭和生长能力的变化。结果HLA-G siRNA转染效率达到80%—90%。siRNA转染后HLA-G mRNA和蛋白表达水平可下调80%—90%。HLA-G表达抑制后JEG-3细胞S期上升,G2-M期下降;早期凋亡明显增多;体外侵袭能力显著降低。结论HLA-G可以影响JEG-3的增殖、凋亡和侵袭。HLA-G可能通过调节细胞增殖、侵袭等过程参与妊娠期高血压疾病的发生。综上所述,应用RNAi技术抑制滋养细胞株JEG-3细胞HLA-G表达后,JEG-3生物学行为发生了改变:增殖和侵袭力下降,凋亡能力增强。其相关机制有待进一步的探索。本研究中应用RNA干扰技术,为深入探索HLA-G在妊娠期高血压疾病发病中的作用奠定了一定的基础。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 试剂与仪器
• 前言
• 第一部分 化学修饰的siRNA体外下调滋养细胞株JEG-3细胞HLA-G的表达
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 第二部分 HLA-G表达下降对JEG-3细胞生物学行为的影响
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 全文小结
• 参考文献
• 综述:人类白细胞抗原G与妊娠期高血压疾病
• 致谢