应用超数排卵与胚胎冷冻技术保护马头山羊品种的研究

论文摘要

本研究的目的是通过马头山羊的超数排卵、超排胚胎的冷冻、冷冻胚胎的移植等技术的有机结合，实现马头山羊的胚胎冷冻保种。本试验围绕这个目的，对马头山羊的超数排卵、超排胚胎的冷冻、冷冻胚胎的移植分别进行了研究。本试验首先研究了处理方法、配种方法、上胎产羔数、膘情、重复超排、基因多态性等因素对马头山羊超数排卵效果的影响，旨在充分发掘优秀马头山羊母畜的繁殖潜力。试验结果表明：（1）在CIDR+FSH+PG超排方法的基础上，同时运用LHRH-A3与P4进行超排可以显著提高只均获胚数（15.63vs12.75）、只均可用胚数（14.75vs11.25）和可用胚率（94.40％vs88.24％）（P＜0.05），得到较好的超排效果；（2）超排供体羊配种时，每隔8h本交一次（公母比例1：1）或每隔8h人工授精一次均可得到较好的超排效果，其只均获胚数、只均可用胚胎数、可用胚率均显著高于每隔8h本交一次（公母比例1：2）或每隔12h本交一次（公母比例1：1）（P＜0.05）；（3）上胎产羔4只的供体羊只均获胚数（16.83vs14.17）和只均可用胚数（15.83vs13.33）显著高于上胎产羔2只以下的供体羊（P＜0.05）；（4）中等膘情的供体羊超排效果较好，其只均获胚数、只均可用胚数和可用胚率均显著高于上等膘情和下等膘情的供体羊（P＜0.05）；（5）对供体羊进行重复超排时，其只均获胚数（15.17vs15.67）、只均可用胚胎数（14.17vs14.83）和可用胚率（93.41％vs94.68％）等指标均略低于首次超排，但统计差异不显著（P＞0.05）；（6）INHA基因不同基因型对供体羊只均获胚数和只均可用胚数的影响一致，均表现为GG＞AG＞AA，但是统计差异不显著（P＞0.05）。本试验随后研究了冷冻方法、解冻时水浴温度以及解冻方法等对马头山羊胚胎冷冻后发育效果的影响，旨在探索出适合马头山羊胚胎的稳定可靠的冷冻保存方法，提高其冷冻保存效率。试验结果表明：（1）采用细管玻璃化冷冻和OPS玻璃化冷冻对胚胎进行冷冻，比较两种方法的效果，发现解冻后胚胎形态正常率（84.09％vs81.08％）、囊胚发育率（63.51％vs60.00％）以细管玻璃化冷冻效果略好，但在方法间统计差异不显著（P＞0.05）；（2）胚胎经细管玻璃化冷冻后，分别采用25℃和37℃水浴进行解冻，发现37℃水浴解冻后的胚胎发育效果略好于25℃水浴解冻，但解冻后胚胎的形态正常率（83.78％vs81.48％）和囊胚发育率（64.52％vs59.09％）在方法间统计差异均不显著（P＞0.05）；（3）胚胎经细管玻璃化冷冻后，分别采用二步法和一步法进行解冻，解冻后胚胎的形态正常率（87.50％vs83.78％）和囊胚发育率（66.67％vs64.52％）在方法间统计差异均不显著（P＞0.05）。本试验最后对受体的同期发情以及马头山羊冻胚移植进行了研究，旨在进一步检验其胚胎冷冻的效果及建立胚胎冷冻保种库进行马头山羊保种的可行性。试验结果表明：（1）受体羊用CIDR进行处理时同期发情率为85.71％，受体羊用孕酮海绵栓进行处理时同期发情率为78.57％，两者同期发情率在方法间统计差异不显著（P＞0.05）；（2）马头山羊超排获得的胚胎经细管玻璃化冷冻-解冻后进行不同类型受体羊移植，经产受体羊与育成受体羊的移植妊娠率分别为46.67％和37.50％，经产受体羊移植妊娠率比育成受体羊高，但统计差异不显著（P＞0.05）。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 1 前言
• 1.1 研究背景
• 1.2 马头山羊胚胎冷冻保种的可行性
• 1.2.1 马头山羊的利用潜力
• 1.2.2 马头山羊保种的现状
• 1.2.3 国内外胚胎冷冻保种现状
• 1.3 羊超数排卵影响因素的研究进展
• 1.3.1 供体因素
• 1.3.2 环境因素
• 1.3.3 药物因素
• 1.3.4 基因多态性与超数排卵的相关性研究
• 1.4 胚胎冷冻保存技术研究进展
• 1.4.1 缓慢冷冻法
• 1.4.2 常规快速冷冻法
• 1.4.3 玻璃化冷冻法
• 1.4.4 胚胎冷冻的影响因素
• 1.5 冷冻胚胎移植妊娠的影响因素
• 1.6 本研究的目的意义
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 试验羊
• 2.1.2 主要仪器和设备
• 2.1.3 主要药品和试剂
• 2.1.4 主要操作液
• 2.2 方法
• 2.2.1 供体羊的超排处理
• 2.2.2 胚胎的采集
• 2.2.3 胚胎检查与鉴定
• 2.2.4 胚胎玻璃化细管法冷冻及解冻
• 2.2.5 胚胎OPS法冷冻及解冻
• 2.2.6 胚胎体外发育培养
• 2.2.7 INHA基因引物设计、扩增与酶切分型
• 2.2.8 受体同期发情
• 2.2.9 冷冻胚胎的移植
• 2.2.10 受体羊饲养管理
• 2.2.11 统计分析
• 3 结果与分析
• 3.1 马头山羊的超数排卵
• 3.1.1 处理方法对超排效果的影响
• 3.1.2 配种方法对超排效果的影响
• 3.1.3 上胎产羔数对超排效果的影响
• 3.1.4 膘情对超排效果的影响
• 3.1.5 重复超排对超排效果的影响
• 3.1.6 基因多态性与超数排卵的相关性
• 3.2 马头山羊超数排卵胚胎的冷冻
• 3.2.1 冷冻方法对胚胎冷冻后发育效果的影响
• 3.2.2 解冻时水浴温度对胚胎冷冻后发育效果的影响
• 3.2.3 解冻方法对胚胎冷冻后发育效果的影响
• 3.3 马头山羊冷冻胚胎的移植
• 3.3.1 处理方法对受体羊同期发情效果的影响
• 3.3.2 冷冻胚胎移植不同类型受体的妊娠效果
• 4 讨论
• 4.1 马头山羊的超数排卵
• 4.1.1 处理方法对超排效果的影响
• 4.1.2 配种方法对超排效果的影响
• 4.1.3 上胎产羔数对超排效果的影响
• 4.1.4 膘情对超数排卵效果的影响
• 4.1.5 重复超排对超排效果的影响
• 4.1.6 基因多态性与超数排卵的相关性
• 4.2 马头山羊超数排卵胚胎的冷冻
• 4.2.1 冷冻方法对胚胎冷冻后发育效果的影响
• 4.2.2 解冻时水浴温度对胚胎冷冻后发育效果的影响
• 4.2.3 解冻方法对马头山羊胚胎冷冻后发育效果的影响
• 4.3 马头山羊冷冻胚胎的移植
• 4.3.1 处理方法对受体羊同期发情效果的影响
• 4.3.2 冷冻胚胎移植不同类型受体的妊娠效果
• 5 小结
• 5.1 本研究的主要结论
• 5.2 本研究创新点及不足之处
• 参考文献
• 致谢
• 附录