印楝素分离、纯化及对瓜绢螟的生物学活性测定

印楝素分离、纯化及对瓜绢螟的生物学活性测定

论文摘要

印楝(Azadirachta indica.A.juss)种仁中含有印楝素(azadirachtin)等活性成分,主要为四环三萜类化合物,已证明其对8目(鳞翅目、同翅目、双翅目、鞘翅目、缨翅目、膜翅目、直翅目、蜱螨目)近400种农林、仓储、卫生害虫具有拒食、产卵忌避、驱避、绝育、生长阻断、杀卵及抑制生长发育等作用。基于印楝在害虫的防治上具有高效性,不伤害天敌,对环境无影响,对哺乳动物和人低毒的特点,印楝已成为国际上公认的最有潜力的杀虫植物;同时如何调控产品中印楝素活性成分的稳定性研究也是国际公认的难题。本文对印楝素的分析、萃取和纯化进行了较系统的研究;并研究影响印楝素稳定性的主要因素和添加稳定剂,以及印楝对瓜绢螟生物学活性测定试验,为印楝生物农药应用于葫芦科蔬菜提供一定的理论基础。1.印楝活性成分纯化研究,本研究采用乙酸乙酯对印楝种仁进行萃取得到含量较高的印楝乙酸乙酯粗提物,再选用快速柱层析法(Flash column chromatography)和薄层色谱法(TLC)对活性物质进行分离,得到含量大于99%的印楝素A等四个同系物成分的纯化合物,采用紫外及可见光光谱法、高效液相色谱法和液相质谱法分离鉴定出4种物质,分别为印楝素A,保留时间5.58min,分子量为720.7 ;6-deacetylsalannin,保留时间11.81min,分子量为554;Nimbin,保留时间16.98min,分子量为540;Salannin,保留时间18.58min,分子量为596。2.确定高效液相色谱法是检测印楝素的有效方法,其检测条件:色谱柱为C18柱,4.6mm×250mm,流动相为乙腈:水=50:50,流速为1mL/min,检测波长为215nm。本方法最低检出限为0.5μg/mL。印楝素A保留时间为5.58min。3.对影响印楝素稳定性的因素做了系统研究,诸如温度、紫外、水分、酸碱度、抗氧化剂和抗光剂等。结果表明,弱酸性条件有利于印楝素的稳定性,碱性加快印楝素的降解,在pH4~6的溶剂中比较稳定;印楝素在4℃和25℃条件下较为稳定,基本不降解;大于35℃时,随着温度的升高印楝素分解明显增加;紫外光对印楝素的影响较大,照射2d时纯品和粗提物中印楝素A降解分别达92.95%和89.11%;印楝素的降解率随着含水量的增加而增大,室温下,处理14d后,二者降解率分别为13.12%和12.28%,在不同水分含量条件下二者的降解存在着差异;Va和Vc均有抑制印楝素A和乙酸乙酯粗提物热分解的作用,Va的抑制作用强于Vc。印楝油和碱木素皆有抗光氧化的作用,二者的能力相差不多,两者都随着抗光剂的量增大降解率有所降低。4.在室内测定了印楝3种提取物(印楝乙酸乙酯萃取、CO2超临界萃取和印楝油)对瓜绢螟的生物活性研究。结果表明:3种提取物对瓜绢螟幼虫都具有较强的拒食作用、生长发育的抑制作用,对成虫产卵忌避作用效果较好,随着浓度的增加,作用趋势明显增强;对低龄幼虫有一定的毒杀活性,而对高龄幼虫活性则很低。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 1 前言
  • 1.1 植物源生物农药研究进展
  • 1.1.1 发展低毒植物源生物农药的必要性
  • 1.1.2 植物农药研究现状
  • 1.2 印楝的研究进展
  • 1.2.1 印楝简介
  • 1.2.2 印楝活性物质成分
  • 1.2.3 印楝素的提取方法
  • 1.2.4 印楝素对昆虫的影响和作用机制
  • 1.2.5 印楝制剂商品化
  • 1.3 瓜绢螟害虫研究进展
  • 1.3.1 瓜绢螟害虫分类及形态特征
  • 1.3.2 瓜绢螟害虫危害现状
  • 1.3.3 瓜绢螟害虫防治现状
  • 1.3.4 瓜绢螟害虫生物防治的趋势
  • 1.4 本文研究目的和意义
  • 2 材料与方法
  • 2.1 试验材料
  • 2.1.1 主要试验材料
  • 2.1.2 主要仪器设备
  • 2.2 试验方法
  • 2.2.1 印楝素A 含量的HPLC 定量分析方法研究
  • 2.2.2 印楝素同系物纯化研究
  • 2.3 印楝提取物对瓜绢螟生物活性研究
  • 2.3.1 产卵忌避作用测定
  • 2.3.2 拒食作用
  • 2.3.3 毒杀作用
  • 2.3.4 生长发育抑制作用
  • 2.4 稳定性试验方法
  • 2.4.1 温度的影响
  • 2.4.2 紫外的影响
  • 2.4.3 水的影响
  • 2.4.4 酸碱性的影响
  • 2.4.5 抗氧剂的作用
  • 2.4.6 抗光剂的作用
  • 3 结果与分析
  • 3.1 印楝素A 含量的HPLC 定量分析方法的建立
  • 3.1.1 印楝素A 标准曲线的建立
  • 3.1.2 回归方程
  • 3.1.3 精密度分析
  • 3.1.4 最低检出限分析
  • 3.1.5 回收率分析
  • 3.2 印楝素同系物分离组分的化学结构鉴定
  • 3.2.1 印楝素A 标准品HPLC 对照分析
  • 3.2.2 紫外及可见光光谱法鉴定分析
  • 3.2.3 印楝乙酸乙酯粗提物HPLC 图对照分析
  • 3.2.4 印楝中活性成分的液质联用分析
  • 3.3 印楝提取物对瓜绢螟生物学研究
  • 3.3.1 印楝提取物对瓜绢螟成虫产卵忌避的影响
  • 3.3.2 印楝提取物对瓜绢螟幼虫的拒食作用
  • 3.3.3 印楝提取物对瓜绢螟幼虫的毒杀活性
  • 3.3.4 印楝提取物对瓜绢螟生长发育抑制作用
  • 3.4 印楝素稳定性研究
  • 3.4.1 温度的影响
  • 3.4.2 紫外光的影响
  • 3.4.3 酸碱性的影响
  • 3.4.4 水的影响
  • 3.4.5 抗氧剂的作用
  • 3.4.6 抗光剂的作用
  • 4 讨论
  • 4.1 对印楝素分离纯化方法的评价
  • 4.2 印楝粗提物的制备工艺
  • 4.3 印楝素稳定性的评价
  • 4.4 印楝活性物质用于防治瓜绢螟的效果评价
  • 4.5 有待进一步研究的问题
  • 5 结论
  • 5.1 印楝活性物质分离纯化
  • 5.2 印楝素A 的HPLC 快速测定方法
  • 5.3 印楝活性物质对瓜绢螟生物学研究
  • 5.4 印楝素稳定性研究
  • 参考文献
  • 附录
  • 致谢
  • 相关论文文献

    标签:;  ;  ;  ;  ;  ;  

    印楝素分离、纯化及对瓜绢螟的生物学活性测定
    下载Doc文档

    猜你喜欢