抗磷脂综合征患者血管内皮细胞活化的研究

论文摘要

抗磷脂综合征（antiphospholip id syndrome,APS）是一种非器官特异性自身免疫性疾病,其特征为血清抗磷脂抗体（antiphosphoslipid antibody,APA）阳性,临床上有静脉或动脉血栓形成、反复妊娠丢失、血小板减少等临床症状。APS可引起多种不良妊娠,如习惯性流产、先兆子痫、胎盘功能不全、胎儿生长受限（fetalgrowth restriction,FGR）、早产,因此成为近年来产科研究的热点。APA导致不良妊娠结局的原因是多方面的,其中血栓形成是一个主要因素。而血管内皮细胞受损伤或激活被认为是血栓形成的首要因素。内皮细胞的活化可表现在许多方面,其中粘附分子表达增加是一个重要的方面。国外许多研究发现抗磷脂抗体可以激活内皮细胞,使粘附分子表达升高。但国内未见报道。由APA引发的内皮细胞活化具有特异的信号转导途径,并非通过简单的磷脂结合途径。β2GP I是APS重要的自身抗原,大多数的APA都是识别β2GP I,故认为内皮细胞膜表面存在着β2GP1的受体。近年来国外研究证实,β2GP I可以通过内皮细胞膜表面的Annexin A2与磷脂发生结合,认为内皮细胞膜上的Annxin A2作为β2GP I的受体,发挥促进内皮细胞活化的作用。本文分为三个部分:第一部分为体外培养脐静脉内皮细胞（HUVEC）,采用实时荧光定量RT-PCR和流式细胞技术检测APS患者血清诱导HUVEC细胞间粘附分子-1（ICAM-1）和E选择素（E-selectin）表达的变化,探讨APS患者是否存在内皮细胞活化。第二部分探讨Annexin A2在APS血管内皮细胞活化中的作用,发现抗Annexin A2抗体可通过非Fc受体途径活化内皮细胞,作为活化受体的Annexin A2可能需交联或聚簇,才能引起内皮细胞活化,抗Annexin A2抗体Fab片断及内皮细胞Annexin A2 siRNA干扰均可阻碍APS血管内皮活化。第三部分通过研究氟伐他汀对APS患者血清诱导HUVEC ICAM-1表达的影响,探讨氟伐他汀是否可因为影响APS内皮活化而成为治疗APS的一种新的选择药物。目的:观察抗磷脂综合征患者血清对血管内皮细胞表达ICAM-1和E-selectin的影响。方法:用采集的10例APS患者和10例健康对照者血清分别处理体外培养的脐静脉内皮细胞,用荧光定量PCR检测脐静脉内皮细胞上细胞间粘附分子-1（ICAM-1）和E-选择素（E-selectin）mRNA表达,用流式细胞仪检测二者蛋白的表达。结果:APS血清处理后脐静脉内皮细胞上粘附分子ICAM-1和E-selectinmRNA和蛋白均比对照组明显升高,差异有显著性（P<0.05）。结论:抗磷脂综合征患者血清可活化血管内皮细胞,使粘附分子表达增加。目的:探讨Annexin A2在抗磷脂综合征血管内皮活化中的作用。方法:用抗Annexin A2抗体及其抗体片断分别处理体外培养的脐静脉内皮细胞,用荧光定量PCR和流式细胞仪分别检测脐静脉内皮细胞上细胞间粘附分子-1（ICAM-1）mRNA和蛋白表达。再用抗Annexin A2抗体Fab片断或AnnexinA2 siRNA对APS血清组脐静脉内皮细胞进行干预,用荧光定量PCR和流式细胞仪分别检测脐静脉内皮细胞上ICAM-1 mRNA和蛋白表达变化。结果:抗Annexin A2抗体和抗Annexin A2抗体F（ab’）2片断均能引起脐静脉内皮细胞上粘附分子ICAM-1 mRNA和蛋白表达增高,而抗Annexin A2抗体Fab不能。经Fab预处理的脐静脉内皮细胞,再经抗Annexin A2抗体或APS血清作用时,ICAM-1 mRNA和蛋白表达较处理前减少。转染Annexin A2 siRNA的脐静脉内皮细胞,APS血清作用时,ICAM-1 mRNA和蛋白表达也较转染前减少。结论:抗Annexin A2抗体通过非Fc途径活化内皮细胞。作为活化受体的Annexin A2可能需交联或聚簇,才能引起内皮细胞活化,抗Annexin A2 Fab可阻碍APS内皮细胞活化.对内皮细胞进行Annexin A2 siRNA干扰也可阻碍APS内皮细胞活化。目的:研究氟伐他汀对抗磷脂综合征血管内皮活化的影响。方法:用APS患者血清、健康对照血清及培基分别处理人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）,其中APS血清处理组预先加入不同浓度的氟伐他汀（0、2.5、5和10μmol/L）进行干预,用实时荧光定量PCR检测脐静脉内皮细胞上细胞间粘附分子-1（intercellular adhesionmolecule,ICAM-1）mRNA表达,用流式细胞仪检测其蛋白的表达。结果:与对照组相比,APS患者血清可诱导ICAM-1 mRNA和蛋白的表达增加,而氟伐他汀干预对ICAM-1mRNA和蛋白表达有不同程度抑制,且呈浓度依赖性（P<0.05）。结论:氟伐他汀可减少脐静脉内皮细胞粘附分子表达,影响抗磷脂综合征患者血管内皮活化。提示他汀类药物可为APS的治疗提供新的选择。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一章 抗磷脂综合征患者血清对血管内皮细胞表达ICAM-1和E-selectin的影响
• 1.1 引言
• 1.2 资料与方法
• 1.3 结果
• 1.4 讨论
• 1.5 结论
• 第二章 Annexin A2在抗磷脂综合征患者血管内皮细胞活化中的作用
• 2.1 引言
• 2.2 资料与方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 2.5 结论
• 第三章 氟伐他汀对抗磷脂综合征患者内皮细胞活化的影响
• 3.1 引言
• 3.2 资料与方法
• 3.3 结果
• 3.4 讨论
• 3.5 结论
• 总结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 已发表的论文及获奖经历