论文摘要
TRAPP(（transport protein particle）复合物是真核生物细胞内参与细胞内膜泡与细胞膜tethering过程的蛋白复合物,在细胞内发现有TRAPPⅠ和TRAPPⅡ两种形式,其中BET3p,BET5p,Trs20p,Trs23p,Trs31p,Trs33p,Trs85p是共有的,而Trs65p,Trs120p,Trs130p是TRAPPⅡ所特有的,其中TRAPPⅠ结合在从内质网运输到高尔基体的膜泡上,而TRAPPⅡ参与高尔基体内部的运输。我们所研究的Synbindin蛋白是TRAPP复合物中Trs23p在人体中的同源蛋白,最先通过酵母双杂交法在人体海马趾神经细胞中发现,通过与Syndecan-2的胞内部分相互作用,从而参与神经树突的形成。我们克隆了该蛋白的基因,在大肠杆菌中得到过量表达,在纯化和结晶该蛋白后,根据Se-MAD法解析了该蛋白的2.8埃的晶体结构;由于该蛋白晶体结构中的PDZ类似结构域活动性较强,导致该区域的电子密度较差,为了获得详细的PDZ类似结构域的结构信息,我们又单独克隆、表达了该结构域,纯化后获得该结构域的核磁结构。Synbindin的结构包括两个结构域:位于N端的类似PDZ结构域和位于C端的Longin结构域即五个反平行的β折叠片位于中间,两侧包括一个N端的α螺旋,和C端的两个反平行的α螺旋组成。从晶体结构中,我们观察到位于Synbindin中其Longin结构域插入了位于N端的PDZ类似结构域,这是目前所有已知Longin结构域中首次发现。而且这个PDZ类似结构域在结构上和典型的PDZ结构域有一定的差异,通过Syndecan-2胞内部分与APD之间的SPR、ITC、核磁滴定实验,发现其和Syndecan-2胞内部分的结合能力较弱。通过对Synbindin晶体结构分析和TRAPP复合物中其他组成单位结构比较,我们提出了Longin结构域之间的可能的结合模式。真核细胞mRNA的翻译的开始是一个复杂的调控过程,这需要很多蛋白的参与,这些蛋白称为真核起始因子（eukaryotic initiation factor）,简称eIF。这中间eIF4G是一个结构蛋白,它可以结合eIF4A和eIF4E形成大的复合物eIF4F。eIF4G还可以募集eIF3,然和结合到核糖体的小亚基上。除此之外,eIF4G还可以结合PABP和Mnk1蛋白。P97蛋白（又称为DAP5）,是和eIF4G的中间和C末端同源的,在翻译起始过程中起到调节作用的蛋白。它可能是作为eIF4G的迷你分子的形式存在,起到调节eIF4G功能的作用。我们使用Se-MAD法获得了eIF4G家族中p97的C端结构域2.0埃分辨率的晶体结构。晶体结构表明p97的C端包含两个非典型的HEAT结构域。虽然一级序列上和eIF4G的C端结构域保守度不高,但是在三级结构上很相似。
论文目录
相关论文文献
标签：复合物论文; 结构域论文; 类似结构域论文; 真核翻译起始因子论文; 非典型性结构域论文;