鲍鱼脏器多糖的分离纯化及结构研究

论文摘要

本文采用碱性蛋白酶为水解酶,从鲍鱼脏器中提取出多糖（AHP）,经过进一步的分离纯化得到一种分子量和极性均一的多糖组分（AHP-12）,并对这种多糖组分的分子量、组成和一级结构进行了研究。在采用胃蛋白酶酶解和Sevage法结合的基础上,再采用链霉蛋白酶和Sevage法结合脱除鲍鱼脏器粗多糖中的蛋白；经透析、冻融除去残留的游离蛋白,冷冻干燥后得到鲍鱼脏器多糖,其蛋白质含量为16.93%。脱蛋白后的鲍鱼脏器多糖经Sephadex G-100凝胶柱层析和DEAE-cellulose52离子交换柱层析分离纯化得到多糖组分AHP-12,经高效液相色谱、琼脂糖凝胶电泳及光谱鉴定确定为均一多糖。其相对分子质量约为300kDa,是由鼠李糖、岩藻糖、半乳糖、甘露糖和木糖组成的一种含硫酸酯多糖,并有氨基糖存在,单糖组成摩尔比为Rha:Fuc:Gal:Man:Xyl=11.6:11.6:9.6:1.3:1,硫酸基含量为13.07%,氨基己糖的含量为4.98%,其中氨基半乳糖的含量为3.54%。采用部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化和气相色谱-质谱联用等多种方法相结合测定了AHP-12的一级结构。结果表明：（1）AHP-12的主链重复单位由Fuc:Gal按1：1构成；（2）主链中Gal存在形式为不可被氧化的Gal（1→3）,Fuc存在形式为可被氧化的Fuc （1→4）;（3） Gal （1→3）间隔排列在可被彻底氧化的Fuc（1→4）之间；（4） Xyl （1→2,3）、Man （1→4）应该存在于侧链当中,而主链籍由Xy1（1→2,3）进行分支；（5） G1cN、Xy1为（1→）键型,所以它们应该位于末端。由此推测AHP-12的结构应为：

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 多糖
• 1.1.1 多糖的研究进展
• 1.1.2 多糖的生物学功能
• 1.1.2.1 多糖的调节免疫功能
• 1.1.2.2 多糖的抗肿瘤作用
• 1.1.2.3 多糖的抗感染、抗病毒作用
• 1.1.2.4 多糖的抗缺氧、抗损伤作用
• 1.1.2.5 多糖的抗衰老作用
• 1.1.2.6 多糖的降血脂作用
• 1.1.2.7 多糖的抗凝血作用
• 1.1.3 多糖的应用
• 1.1.3.1 多糖在医药学方面的应用
• 1.1.3.2 多糖在食品工业中的应用
• 1.1.3.3 多糖在其他方面的应用
• 1.2 多糖的研究方法
• 1.2.1 多糖的提取
• 1.2.1.1 动物多糖的提取
• 1.2.1.2 植物多糖的提取
• 1.2.1.3 菌类多糖的提取
• 1.2.2 多糖的分离
• 1.2.2.1 蛋白质的去除
• 1.2.2.2 色素的去除
• 1.2.2.3 低聚糖等小分子杂质的去除
• 1.2.3 多糖的纯化及纯度鉴定
• 1.2.3.1 多糖的纯化
• 1.2.3.2 多糖的纯度鉴定
• 1.2.4 多糖的分子量测定
• 1.2.5 多糖的结构分析
• 1.2.5.1 化学分析法
• 1.2.5.2 物理分析法
• 1.2.5.3 生物学方法
• 1.3 鲍鱼多糖
• 1.3.1 鲍鱼的营养价值
• 1.3.2 鲍鱼的加工现状
• 1.3.3 鲍鱼多糖的研究进展
• 1.4 论文的主要内容及研究意义
• 1.4.1 本论文的主要内容
• 1.4.2 本论文的研究意义
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 原料
• 2.1.2 实验试剂及设备
• 2.1.2.1 主要实验试剂
• 2.1.2.2 实验中所用的蛋白酶
• 2.1.2.3 主要仪器和设备
• 2.2 测定方法
• 2.2.1 蛋白质含量的测定
• 2.2.2 多糖含量的测定
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 鲍鱼脏器多糖的提取
• 2.3.2 鲍鱼脏器多糖的分离纯化
• 2.3.2.1 胃蛋白酶结合Sevage法脱蛋白
• 2.3.2.2 链霉蛋白酶结合Sevage法脱蛋白
• 2.3.2.3 透析和冻融分级
• 2.3.2.4 鲍鱼脏器多糖的柱层析分级
• 2.3.3 AHP-12的纯度鉴定
• 2.3.3.1 高效液相色谱法鉴定AHP-12的纯度
• 2.3.3.2 琼脂糖凝胶电泳鉴定AHP-12的纯度
• 2.3.3.3 红外光谱分析
• 2.3.3.4 紫外光谱分析
• 2.3.4 AHP-12相对分子质量的确定
• 2.3.5 AHP-12组成的研究
• 2.3.5.1 AHP-12中硫酸基鉴定及含量测定
• 2.3.5.2 AHP-12中氨基己糖的含量测定
• 2.3.5.3 AHP-12的单糖组成测定
• 2.3.6 AHP-12结构的研究
• 2.3.6.1 AHP-12的部分酸水解
• 2.3.6.2 AHP-12的高碘酸氧化和Smith降解
• 2.3.6.3 AHP-12的甲基化
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 鲍鱼脏器多糖的提取
• 3.2 鲍鱼脏器多糖的分离纯化
• 3.2.1 鲍鱼脏器多糖脱蛋白方法的确定
• 3.2.2 鲍鱼脏器多糖的柱层析分级
• 3.3 AHP-12的纯度鉴定结果
• 3.3.1 高效液相色谱法对AHP-12纯度的鉴定
• 3.3.2 琼脂糖凝胶电泳对AHP-12纯度的鉴定
• 3.3.3 AHP-12的红外光谱分析
• 3.3.4 AHP-12的紫外光谱分析
• 3.4 AHP-12的相对分子质量
• 3.5 AHP-12的组成分析结果
• 3.5.1 AHP-12中硫酸基鉴定及含量测定结果
• 3.5.2 AHP-12中氨基己糖含量测定结果
• 3.5.3 AHP-12单糖组成的测定
• 3.6 AHP-12的结构分析结果
• 3.6.1 AHP-12的部分酸水解实验结果
• 3.6.2 AHP-12的高碘酸氧化及Smith降解实验结果
• 3.6.3 AHP-12的甲基化分析结果
• 3.6.4 AHP-12的结构分析结果
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录A
• 附录B