铜绿假单胞菌OXA型超广谱β-内酰胺酶耐药基因研究

论文摘要

目的OXA型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）是由OXA-10,OXA-2和OXA-1三个基因来源的,共分为五组,以第一、二组为主,其主要存在于铜绿假单胞菌中。为了解湘雅医院铜绿假单胞菌中OXA型ESBLs的检出率及其基因的分布情况,开展本次研究。方法收集中南大学湘雅医院2006年9月至2007年1月的非重复铜绿假单胞菌97株,保存于脱脂牛奶管中,放置于-20℃冰箱。所有菌株采用法国梅里埃公司的全自动微生物鉴定系统VITEK-2的GN卡鉴定和AST GN-13卡进行药敏分析。对97株非重复铜绿假单胞菌采用聚合酶链反应（PCR）进行OXA型ESBLs第一、二组基因筛查,然后用特异性引物对筛查阳性的菌株进行OXA基因扩增,将PCR扩增的DNA产物纯化后进行测序分析,并用BLAST将测序结果与基因库已知序列进行对比分析,确定其基因型。结果经PCR法筛查共检出3株OXA型ESBLs阳性的铜绿假单胞菌,OXA型ESBLs检出率为3.1%（3/97）,1株（PA13）来自尿标本,1株（PA15）来自痰标本,1株（PA17）来自引流液标本。这3株PCR扩增阳性的铜绿假单胞菌全部携带OXA型ESBLs第一组基因,OXA型ESBLs第二组未检测到阳性菌株。然后用OXA-10及其衍生物的特异性引物进一步扩增及测序,结果显示,PA15和PA17的基因序列完全一致,另1株PA13为另一不同的基因序列,经GenBank网上同源性比较,均未发现完全相同的核苷酸和氨基酸序列,提示这两种基因序列为新的OXA型ESBLs基因型,命名为blaOXA-128和blaOXA-129,在GenBank上成功注册,基因登录号为:EU573214和EU573215。结论（1）本研究在国际上首次发现两种新型的OXA型ESBLs分别为blaOXA-128和blaOXA-129。（2）在湖南地区首次从铜绿假单胞菌中检出OXA型ESBLs,湘雅医院OXA型ESBLs的检出率较低。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词表
• 第一章 前言
• 第二章 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 临床菌株
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 技术路线
• 2.2.2 细菌的培养、鉴定和保存
• 2.2.3 用筛查引物进行 PCR扩增
• 2.2.4 特异性 PCR扩增
• 2.2.5 特异性 PCR扩增产物测序及基因型的确定
• 第三章 结果
• 3.1 PCR筛查检测 OXA型 ESBLs结果
• 3.2 特异性 PCR扩增 OXA型 ESBLs结果
• 3.3 测序结果
• 3.4 3株 OXA型 ESBLs阳性铜绿假单胞菌药敏试验结果
• 第四章 讨论
• 4.1 携带 OXA基因铜绿假单胞菌的耐药情况与分析
• 4.2 PCR筛查结果分析与讨论
• 4.3 OXA特异性 PCR扩增结果与讨论
• 4.4 测序结果分析与讨论
• 4.5 临床意义
• 4.6 不足之处
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间研究成果