Slit2与受体Robo1在胃癌中的表达及与血管生成的关系

论文摘要

目的:研究神经迁移因子Slit2及其跨膜受体Robo1（Roundabout1）在胃癌组织及癌旁组织中的表达,结合临床病理与肿瘤微血管密度（MVD,microvessel density）探讨两者与胃癌发生、发展、转移及血管生成的关系,为胃癌的诊断和生物治疗提供新思路。方法:胃癌组织和癌旁组织Trizol法提取总RNA后,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测54例胃癌及癌旁组织中Slit2基因mRNA的表达,凝胶自动成像系统摄像并分析各条带吸光度值;免疫组织化学SP法检测28例胃癌及癌旁组织中Slit2蛋白和Robo1蛋白的表达,应用CD34标记检测肿瘤微血管密度（MVD,microvessel density）。同时研究实验结果与临床病理指标间的联系。结果:1.在54例胃癌组织中38例（70.4%）可检测到Slit2 mRNA表达,癌旁组织中有33例（61.1%）检测到Slit2 mRNA表达。以β-actin为参照,胃癌组织中Slit2 mRNA表达水平为0.61±0.21,癌旁组织中为0.84±0.07,两组间Slit2 mRNA表达率及表达水平均无显著性差异（x2=1.0278,P＞0.05;t＇=2.0057,P＞0.05）。且Slit2mRNA表达水平仅与患者年龄具有相关性;与其他临床病理特征无显著性关联。2.在28例免疫组化胃癌组织中17例（60.7%）Slit2蛋白表达阳性,其反应主要出现在肿瘤细胞的胞浆和胞膜,呈现棕黄色颗粒或团块;部分可见Slit2表达强阳性的癌细胞呈巢状或条索状浸润至黏膜层及邻近的组织,并观察到癌细胞浸润的前缘区域较表层表达程度增强。与癌旁对照组织6例（21.4%）表达阳性相比,胃癌组织中Slit2蛋白表达率显著增加（x2=8.9275,P＜0.01）。3.在28例免疫组化胃癌组织中21例（75%）Robo1蛋白表达阳性,主要出现于腺癌细胞和部分血管内皮细胞胞浆内（见图3、4）。在肿瘤中心部位Robo1同样较外周表达更强。癌旁组织中8例（28.6%）表达阳性,与癌旁对照组织相比,胃癌组织中Robo1蛋白表达率显著增加（x2=12.0868,P＜0.01）。4.Slit2蛋白表达水平与患者肿瘤大小、临床分期呈显著性相关;Robo1蛋白表达与肿瘤大小、临床分期和淋巴结转移呈显著性相关。28例胃癌患者中两蛋白表达均阳性者16例,均阴性者5例,Pearson相关分析表明Slit2蛋白表达与Robo1蛋白表达有显著正相关（r=0.4202,P＜0.01）。5.胃癌组中Slit2（-）者11例,其MVD为20.41±1.73;Slit2（+）者17例,MVD为29.64±3.11,两者差异有显著性（t=2.145,P＜0.05）。Robo1（-）者7例,其MVD为20.42±1.08;Robo1（+）者21例,MVD为27.91±2.40,两者差异亦有显著性（t=2.1467,P＜0.05）。同时MVD示肿瘤内微血管分布不均匀,间质内微血管的大小、形态明显不一,部分为单个内皮细胞或细胞簇,部分管腔不明显或不规则,所测胃癌组织中平均MVD值为24.44±6.79,癌旁正常组织中MVD平均值为19.37±5.2,两两比较具有显著性差异（t=3.414,P＜0.05）。结论:1.胃癌组织中Slit2的表达在转录水平无明显异常,主要改变可能发生于转录后或翻译水平,进一步证明胃癌发生是一多步骤多基因改变的复杂过程。2.胃癌细胞中可见Slit2蛋白表达,血管内皮细胞可见Robo1表达,两者有较强相关性但并不完全平行,可能与启动子甲基化使Slit2修饰失活致表达下调,同时配体Slit2的下调又会引起受体Robo1蛋白的代偿性增加有关。3.Slit2、Robo1及MVD的过表达使胃癌具有更高的侵袭性。Slit2可以通过作用于Robo1促进胃癌新生血管的生成,MVD随着肿瘤恶性程度升高而增加,MVD与Slit2/Robo1蛋白表达呈显著性正相关,这是血管形成适应肿瘤快速生长的结果,同时也说明了Slit2/Robo1与肿瘤新生血管形成有着密切的关系。意义:血管系统和神经系统的发育具有很多相似的结构特征和生长机制,神经迁移因子Slit2/Robo1通路在胃癌发生和血管形成中的作用验证了这一点,Slit2及Robo1蛋白增多和MVD值可作为判断胃癌生长、浸润、转移的重要指标。其具体表达机制仍需进一步研究,对胃癌的辅助诊断和肿瘤抗血管生成治疗具有较重要的临床意义。

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