家兔卵巢切除及雌激素治疗后脑部nNOS阳性神经元及突触素的表达研究

论文摘要

众所周知,随着卵巢功能的衰退,大多数妇女在围绝经期、绝经后会出现不同程度的更年期症状,影响了工作和日常生活,为了提高中老年人生活质量,缓解更年期症状,临床上已经开始使用雌激素替代治疗法(estrogen replacement therapy, ERT)。雌激素是维持妇女正常生理与心理所必需的内源性活性物质。在中枢神经系统中,它不仅作用于脑内与生殖相关的神经回路(GnRH神经元网络),影响生殖过程,而且还作用于与认知功能相关的神经回路(海马回路),影响学习和记忆。为深入研究雌激素具有神经保护作用的确切机理,本试验将兔切除卵巢,作为妇女更年期后卵巢功能衰竭、雌激素分泌严重不足时的良好模型。然后通过人为注射雌激素治疗,观察兔脑部神经型一氧化氮合酶(nNOS)和突触素表达的变化,来研究雌激素保护中枢神经系统,预防老年痴呆和记忆力减退等神经症状的机理,为神经病理学和生理学研究提供科学的形态学依据。实验一利用SABC免疫组织化学法,在光学显微镜下对各组兔下丘脑内室旁核(PVN)、视上核(SON)、下丘脑前区(AHA)和视交叉上核(SCN)等核团内神经型一氧化氮合酶(nNOS)阳性神经元及突触素的形态结构进行观测;采用图像分析系统测定nNOS阳性神经元内以及突触素免疫反应产物的平均光密度值。结果表明:1.假手术组兔下丘脑内分布有大量的nNOS,以SON、PVN、SCN、AHA表达较强,弓状核仅有少量的nNOS阳性神经元;卵巢切除以后,各神经核nNOS阳性神经元的表达明显增强,即数量增多,染色加深;雌激素治疗后各神经核nNOS阳性神经元的表达与卵巢切除组相比反而减弱。2.切除卵巢组兔下丘脑各神经核突触素的免疫组化染色比假手术组明显减弱,染色变浅,雌激素治疗后兔下丘脑各神经核突触素表达增强。实验二利用SABC免疫组织化学法,在光学显微镜下对各组兔海马内nNOS阳性神经元及突触素的形态结构进行观测;采用图像分析系统测定海马nNOS阳性神经元以及突触素免疫反应产物的平均光密度值。结果表明:1.海马各区nNOS阳性神经元分布丰富。切除卵巢后各区nNOS阳性神经元表达减弱,雌激素治疗后nNOS阳性神经元的表达增强。2.切除卵巢后海马突出素表达比假手术组减弱,雌激素治疗后,表达比去卵巢组增强。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略表
• 引言
• 1 雌激素与脑功能的研究进展
• 2 一氧化氮的生物学特性
• 2.1 NO 的合成分布特点
• 2.2 NO 的气体分子特性
• 2.3 NO 在脑内的作用
• 2.3.1 NO 的信使传递效应
• 2.3.2 NO 具有逆向信使作用
• 2.3.3 NO 在脑中的分布
• 3 突触素
• 3.1 突触可塑性
• 3.2 突触素的分子生物学特性
• 3.3 突触素神经递质调节作用
• 3.4 突触素的实际应用
• 4 下丘脑的概述
• 4.1 下丘脑的解剖部位与形态、结构
• 4.2 下丘脑的功能
• 5 海马的解剖部位与形态、结构
• 6 本课题研究的目的和意义
• 实验一、兔切除卵巢及突触素治疗后下丘脑nNOS 阳性神经元及突触素的表达
• 1 材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 实验用兔
• 1.1.2 实验场地及预备实验
• 1.1.3 试剂
• 1.1.4 主要试验仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 动物模型的制作
• 1.2.2 分组及其给药方法
• 1.2.3 取材与制片
• 1.2.4 SABC 免疫组织化学染色
• 1.2.4.1 nNOS 免疫组化步骤
• 1.2.4.2 突触素免疫组化染色步骤
• 1.3 观察和测量
• 1.4 数据统计与分析
• 2 结果与分析
• 2.1 各组下丘脑nNOS 阳性神经元表达
• 2.1.1 假手术组nNOS 阳性神经元在下丘脑分布的形态与特征
• 2.1.2 卵巢切除组下丘脑nNOS 阳性神经元分布的变化
• 2.1.3 雌激素治疗组下丘脑nNOS 阳性神经元分布的变化
• 2.2 各组下丘脑突触素表达的变化
• 3 讨论
• 3.1 关于各组下丘脑nNOS 阳性神经元的表达变化
• 3.2 关于各组下丘脑突触素的表达变化
• 试验二、兔切除卵巢及雌激素治疗后海马nNOS 阳性神经元及突触素的表达
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 观察和测量
• 1.4 数据统计分析
• 2 结果与分析
• 2.1 各组海马nNOS 阳性神经元表达的变化
• 2.2 海马突触素免疫组化染色结果
• 3 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文