论文题目: 白喉毒素-α促黑素重组毒素的制备及其特异性毒性研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 预防兽医学
作者: 李泽鸿
导师: 朱平
关键词: 促黑素,白喉毒素,重组毒素,肿瘤
文献来源: 吉林大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本文构建了DAB389（Gly4Ser）2-αMSH重组毒素,并对它的分子生物学特征、培养条件、发酵条件、纯化条件及特异性毒性进行了探索和实验。 以pET28a/DAB389（Gly4Ser）2EGF为模板,扩增出DAB389-（Gly4Ser）2-αMSH片段,将片段插入到原核表达载体pET28a（+）,构建了重组表达质粒pET28afDAB389（Gly4Ser）2-αMSH;并在大肠杆菌中进行了高效表达。免疫印迹分析显示可与马抗白喉抗体发生特异性免疫反应。 探索了目的蛋白的优化表达条件,蛋白表达量为28.64%:发酵培养湿菌产量达到16.5g/L;目的蛋白经亲和层析柱一次纯化,纯度达到90.53%;利用Xa因子切割蛋白,制备电泳分离后,目的蛋白的纯度达到93.26%;检测了目的蛋白对SP2/0、HeLa、A549、A375细胞的IC50:BALB/c鼠荷瘤实验表明抑瘤率达到64%。 本实验的创新:首次构建了DAB389（Gly4Ser）2-αMSH重组毒素,并插入了His·Tag和Xa因子的切割序列,增强了目的蛋白的活性,减少了生产成本和纯化程序。
论文目录:
前言
第一篇 文献综述
第一章 促黑素细胞激素的研究进展
1 α-MSH的产生和分布
2 α-MSH的生成机制和生理作用
3 α-MSH的抗炎作用和免疫调节作用
4 α-MSH及POMC的相关受体
5 α-MSH与受体的关系
第二章 白喉毒素的结构毒性及其在重组毒素中的应用
1 白喉毒素的结构
2 白喉毒素的突变体
3 白喉毒素的性质
4 白喉毒素的功能
5 白喉毒素与受体的作用
6 白喉毒素的毒性作用
7 白喉毒素的抗癌作用
第三章 白喉毒素免疫毒素的研究进展
1 白喉毒素免疫毒素
2 白喉毒素免疫毒素的构造和效应
3 白喉毒素免疫毒素的开发应用
4 白喉毒素免疫毒素的不足
5 白喉毒素免疫毒素的发展前景
第二篇 研究内容
第一章 DAB_(389)(Gly_4Ser)_2-αMSH基因的构建和高效表达
1 材料和方法
2 结果
3 讨论
4 小结
第二章 DAB_(389)-αMSH、DAB_(389)(Gly_4Ser)_2-αMSH的分子生物学特性预测
1 材料和方法
2 结果
3 讨论
4 小结
第三章 DAB_(389)(Gly_4Ser)_2-αMSH工程菌表达条件的优化
1 材料和方法
2 结果
3 讨论
4 小结
第四章 DAB_(389)(Gly_4Ser)_2-αMSH工程菌发酵及纯化工艺的研究
1 材料和方法
2 结果
3 讨论
4 小结
第五章 DAB_(389)(Gly_4Ser)_2-αMSH重组蛋白体外细胞毒性实验
1 材料和方法
2 结果
3 讨论
4 小结
第六章 DAB_(389)(Gly_4Ser)_2-αMSH对动物的药效实验
1 材料和方法
2 结果
3 讨论
4 小结
结论
参考文献
附录
致谢
导师简介
个人简历
中文详细摘要
英文摘要
发布时间: 2005-08-26
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