论文摘要
近年来，相继克隆出多种与肿瘤浸润转移相关的基因，其中肿瘤转移基因（metastasis-associated gene 1，MTA1）是研究发现的与信号传导及基因调节有关的肿痛转移相关基因。研究已证实人MTA1蛋白含有一些基因调节蛋白和结合蛋白的结构，而在肿瘤细胞的浸润和转移过程中，MTA1基因产物可能在信号传导途径中发挥着重要作用。目前大量的研究表明MTA1与多种恶性肿瘤浸润转移密切相关。转移抑制基因（non-metastatic gene23-H1，nm23-H1）是一种肿瘤转移表型抑制相关基因，其编码产物为二磷酸核苷激酶（nucleoside diphosphate kinase，NDPK），此酶参与体内三磷酸核苷的生成，一个亚基的失活使NDPK比例失衡，NTP产生不足，影响微管聚合，导致染色体裂变和非整倍体的形成，促进了肿瘤的转移。有研究表明nm23-H1基因可通过抑制细胞对血小板源性生长因子、胰岛素样生长因子-Ⅰ反应而影响细胞的运动，从而抑制肿瘤的转移过程。研究证实在多种高转移潜能的肿瘤，nm23-H1基因发生突变、缺失或表达降低，表明nm23-H1与恶性肿瘤转移潜能密切相关。上皮钙黏素（E-cadherin，E-cad）属于细胞黏附分子家族成员中跨膜蛋白亚型的一种，主要存在于上皮细胞，其阳性表达有抑制痛转移的功能。E-cad表达下降或缺失，细胞间的相互黏附能力下降，造成肿瘤细胞容易分散而向外周浸润生长，从而脱离原发灶发生浸润和转移。研究发现，E-cad表达的下调或缺失是肿瘤重要的恶性生物学行为，提示E-cad的表达程度可以作为恶性肿瘤转移能力强弱的指标之一。中国是世界上食管癌发病率和死亡率最高的国家，河南省食管癌发病率和死亡率均居中国首位，而浸润、转移是导致食管癌患者死亡的主要原因，因此探讨食管癌的浸润、转移机制已成为研究的热点之一。有关MTA1、nm23-H1及E-cad在食管鳞癌组织中的表达及意义的研究，至今国内外尚未见文献报道。本研究采用免疫组化SP法，分别观察了高发区49例食管癌组织、30例癌旁非典型增生组织及49例正常食管黏膜上皮组织中MTA1、nm23-H1及E-cad蛋白的表达情况，三者的联合检测为进一步阐明食管癌的浸润、转移机制，寻找抑制食管癌浸润、转移的有效方法，提高食管癌患者的生存时间、降低死亡率提供了理论基础。材料组织标本系食管癌高发区河南省安阳市肿瘤医院及郑州大学第一附属医院2004年9月至2004年11月食管癌新鲜手术切除标本49例，每例手术标本分别在癌灶、癌旁、正常组织三处取材。病理证实均为鳞状细胞癌。选取全部49例癌组织、30例癌旁非典型增生组织和49例正常食管黏膜上皮组织作为本研究的观察对象。49例食管癌标本按有无淋巴结转移分为：有淋巴结转移组（20例）和无淋巴结转移组（29例）；按浸润深度分为：浅肌层组（10例）、深肌层组（15例）及外膜组（24例）；按发生发展可分为：食管癌组（49例）、癌旁非典型增生组（30例）及正常食管黏膜组（49例）。全部标本经10％甲醛固定，石蜡包埋，4μm厚连续切片，以备免疫组织化学用。方法1．采用免疫组化SP法分别对49例食管癌组织、30例癌旁非典型增生组织及49例正常食管黏膜上皮组织中MTA1、nm23-H1及E-cad蛋白的表达进行检测。2．统计学处理：所有数据均经SPSS11.0软件进行统计分析。阳性率之间的比较采用X2检验（chi-square）；两变量之间的关系分析采用spearman等级相关分析表示，以α=0.05为显著性检验水准。结果1．正常食管黏膜上皮组织MTA1蛋白阳性表达率为0％（0/49），非典型增生组织MTA1蛋白阳性表达率为26.67％（8/30），食管癌组织中MTA1蛋白阳性表达率为63.27％（31/49）。癌组织MTA1蛋白阳性表达率与相应的癌旁非典型增生组织及正常食管黏膜上皮组织两两相比，差异均有统计学意义（P＜0.05）。2．正常食管黏膜上皮组织nm23-H1蛋白阳性表达率为100％（49/49），非典型增生组织nm23-H1蛋白阳性表达率为66.67％（20/30），食管癌组织中nm23-H1蛋白阳性表达率为46.93％（23/49）。癌组织nm23-H1蛋白阳性表达率与相应的癌旁非典型增生组织及正常食管黏膜上皮组织两两相比，差异均有统计学意义（P＜0.05）。3．食管癌组织、非典型增生组织和正常食管黏膜上皮组织E-cad蛋白阳性表达率分别为46.89％（22/49）、70％（21/30）和100％（49/49），癌组织E-cad蛋白阳性表达率与相应的癌旁非典型增生组织及正常食管黏膜上皮组织两两相比，差异均有统计学意义（P＜0.05）。4．20例伴有淋巴结转移食管鳞癌组织MTA1蛋白阳性表达率为80％（16/20），无淋巴结转移29例食管鳞癌组织MTA1蛋白阳性表达率为51.72％（15/29），两组间食管鳞癌组织MTA1蛋白阳性表达率差异有显著性（P＜0.05）。5．20例伴有淋巴结转移食管鳞癌组织nm23-H1蛋白阳性表达率为30％（6/20），无淋巴结转移29例食管鳞癌组织nm23-H1蛋白阳性表达率为62.07％（18/29），两组间食管鳞癌组织nm23-H1蛋白阳性表达率差异有显著性（P＜0.05）。6．20例伴有淋巴结转移食管鳞癌组织E-cad蛋白阳性表达率为25％（5/20），而无淋巴结转移29例食管鳞癌组织E-cad蛋白阳性表达率为58.62％（17/29），两组间食管鳞癌组织E-cad蛋白阳性表达率差异有显著性（P＜0.05）。7．浸润浅肌层、深肌层和食管外膜的食管鳞癌组织中MTA1蛋白阳性表达率分别为：40％（4/10）、46.67％（7/15）和83.33％（20/24），浸润外膜的食管鳞癌组织MTA1蛋白阳性表达率明显高于前两者，差异有统计学意义（P＜0.05），而浸润深肌层的食管鳞癌组织中MTA1蛋白阳性表达率与浅肌层组相比差异无显著性（P＞0.05）。8．浸润浅肌层、深肌层和食管外膜的食管鳞癌组织中nm23-H1蛋白阳性表达率分别为：80％（8/10）、40％（6/15）和37.5％（9/24），浸润浅肌层的食管鳞癌组织nm23-H1蛋白阳性表达率明显高于后两者，差异有统计学意义（P＜0.05），而浸润深肌层的食管鳞癌组织中nm23-H1蛋白阳性表达率与外膜组相比差异无显著性（P＞0.05）。9．浸润浅肌层、深肌层和食管外膜的食管鳞癌组织中E-cad蛋白阳性表达率分别为：90％（9/10）、46.67％（7/15）和25％（6/24），浸润浅肌层的食管鳞癌组织E-cad蛋白阳性表达率明显高于后两者，差异有统计学意义（P＜0.05），而浸润深肌层的食管鳞癌组织中E-cad蛋白阳性表达率与外膜组相比差异无显著性（P＞0.05）。10．MTA1、nm23-H1及E-cad蛋白在食管鳞癌中的表达相关性经统计学分析显示，前者与后两者之间均呈负相关（P＜0.01），后两者之间呈正相关（P＜0.01）。结论1．正常食管黏膜上皮组织、癌旁非典型增生组织及食管鳞癌组织中MTA1蛋白阳性表达率均依次升高，且正常食管黏膜上皮组织、癌旁非典型增生组织及癌组织中MTA1蛋白阳性表达间相比，差异有显著性，表明MTA1与食管鳞癌的发生发展有关。2．MTA1在转移组食管鳞癌组织中的蛋白阳性表达高于无转移组，差异有显著性，提示MTA1蛋白表达与食管鳞癌转移有关。3．正常食管黏膜上皮组织、癌旁非典型增生组织及食管鳞癌组织中nm23-H1蛋白、E-cad蛋白阳性表达率均依次降低，且正常食管黏膜上皮组织、癌旁非典型增生组织及癌组织中nm23-H1蛋白、E-cad蛋白阳性表达间相比，差异有显著性，表明nm23-H1、E-cad蛋白的表达与食管鳞癌的发生发展有关。4．nm23-H1及E-cad在转移组食管鳞癌组织中的蛋白阳性表达率低于无转移组，差异有显著性，提示nm23-H1及E-cad蛋白的表达与食管鳞癌转移有关。5．MTA1在不同浸润深度的食管鳞癌组织中的蛋白阳性表达率不同，随着癌细胞浸润深度的加深，癌组织中的蛋白阳性表达率逐渐升高，且浸润至食管外膜层的癌组织中的蛋白阳性表达率明显高于浸润浅肌层和深肌层的相应组织。提示MTA1蛋白表达与食管鳞癌浸润有关。6．nm23-H1及E-cad在不同浸润深度的食管鳞癌组织中的蛋白阳性表达率不同，随着癌细胞浸润深度的加深，癌组织中的蛋白阳性表达率逐渐降低，且浸润至食管浅肌层的癌组织中的蛋白阳性表达率明显高于浸润深肌层和外膜层的相应组织。提示nm23-H1、E-cad蛋白的表达与食管鳞癌浸润有关。7．MTA1、nm23-H1及E-cad蛋白在食管鳞癌组织中的表达经统计学分析具有相关性，表明三者可能在食管鳞癌的发生、发展及浸润、转移过程中起协同作用。