论文摘要
目的胶质疤痕是中枢神经系统受损或病理过程的普遍性结果,星形胶质细胞（astrocytes,As）是组成胶质疤痕的主要胶质细胞成分,对中枢神经系统各种损伤的反应以反应性胶质化为特征。本研究采用体外培养的大鼠皮层星形胶质细胞,以转化生长因子-β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）为刺激因子,建立脑损伤的细胞模型,观察星形胶质细胞形态学的变化,并观察星形胶质细胞骨架蛋白胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidicprotein,GFAP）与转化生长因子-β1纤维化作用的下游效应分子结缔组织生长因子（connective tissue growth factor ,CTGF）的基因翻译水平和蛋白质合成水平的变化,探讨中枢神经系统损伤后反应性胶质化的发生机制,为今后神经干细胞移植治疗神经系统疾病中抑制胶质细胞的有害作用寻找可能的靶点。方法1.体外培养大鼠星形神经胶质细胞:参照McCarthy的培养方法并加以改良,多次差速粘附处理及传代。传三代,进行GFAP免疫荧光染色鉴定细胞。2.用不同浓度的TGF-β1孵育培养星形胶质细胞24小时,倒置相差显微镜下观察As形态,半定量RT-PCR测GFAPmRNA的相对表达量, Western-blotting进行GFAP蛋白定量,观察TGF-β1诱导As反应性胶质化。3.对不同浓度的TGF-β1孵育培养的反应性胶质化的As,半定量RT-PCR测CTGFmRNA的相对表达量, Western-blotting进行CTGF蛋白定量。在转录和翻译水平研究转化生长因子-β1对As结缔组织生长因子表达的影响。结果1.经过处理培养的细胞传三代,进行GFAP免疫荧光染色检测,绝大多数细胞（>95%）表现GFAP阳性。2.TGF-β1孵育培养的星形胶质细胞形态均发生改变,As细胞胶质纤维酸性蛋白（ GFAP）的mRNA和蛋白的表达均增加,而且该影响均随着TGF-β1浓度的增加而更为显著（P<0.05）。3.TGF-β1孵育培养的星形胶质细胞结缔组织生长因子（CTGF）的mRNA和蛋白的表达均增加,而且该影响均随着TGF-β1浓度的增加而更为显著（P<0.05）。结论1.本课题采用的星形胶质细胞培养方法获得细胞纯度较高,可用于研究。2.以TGF-β1刺激体外培养的SD大鼠的星形胶质细胞可以使之产生胶质化改变。3.TGF-β1会增加胶质化改变的As细胞CTGF的mRNA和蛋白的表达,而且该影响均随着浓度的增加而更为显著。CTGF可能作为今后治疗神经系统疾病中抑制胶质瘢痕有害作用的靶点加以进一步研究。
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标签：星形胶质细胞论文; 反应性胶质化论文; 胶质纤维酸性蛋白论文; 转化生长因子论文; 结缔组织生长因子论文;