论文摘要
前言近年来结核病疫情呈现上升趋势，是目前感染率和死亡率最高的传染性疾病，结核病的快速诊断是全球控制结核病的重要措施。目前对结核病的诊断主要依据细菌学检查与结核菌素试验，由于结核分枝杆菌（mycobacrterium tuberculosis，MTB）本身生长特点以及卡介苗（Bacillus Calmette-Guerin，BCG）接种在我国的广泛使用，使得这些方法对结核病诊断极为有限。ESAT-6（early secretory antigrntic target-6，ESAT-6）是一种特异性低分子质量分泌性蛋白，仅存在于致病性结核杆菌中，如人型、牛型、非洲及某些非典型分枝杆菌（如堪萨斯、苏尔加和海水分枝杆菌），而BCG及其他非致病性分枝杆菌则不含有。ESAT-6能刺激机体产生特异性免疫球蛋白，因此利用其结合特性，采用ELISA方法检测患者血清抗原和抗体含量，就可以区分MTB感染还是接种了BCG。CFP-10（culture filtrate protein-10）是1998年鉴定出来的低分子质量蛋白，能被特异性识别并释放γ干扰素（interfe ron-γ，IFN-γ）。因此，CFP-10可作为T细胞诊断抗原。CFP-10和ESAT-6联合可使敏感性提高到90％，特异性提高到97％。本文通过ELISA实验在血清中检测CFP—10和ESAT-6这两种结核分枝杆菌特异性抗原在确诊肺结核病患者、肺炎患者以及排除了其他传染病的正常人群中的表达，与结核菌素实验在上述人群中的检测及这两种实验方法在特异度和灵敏度的比较，研究及评价该实验在临床诊断中的意义。实验材料与方法1、病例选择选取沈阳市胸科医院住院患者60例，其中20例为确诊肺炎患者，其中40例为肺结核确诊病例，其中男性23例，女性17例，年龄在16到69岁之间。（所有患者满足以下标准1．初治患者尚未开始用结核药；2．复治患者未用结核药一年以上）正常对照组20例，选取结核菌素（PPD）实验阴性人群，主要为10岁以下儿童。2、标本处理采集所有受试对象（结核病患者在接受抗结核治疗前）空腹静脉血2ml，3000转／min离心3分钟，分离血清，-20℃保存。3、实验方法测定（1） ELISA实验①取100ul不同浓度的标准品及血清加入反应在孔中，25℃放置1小时。②冲洗3次后，加入酶标记的抗体，25℃放置1小时。③冲洗3次后，加入显色液，20分钟后，在所有孔内都加入100ul终止液，混匀后即用酶标仪在450nm处测定各孔溶液的吸光度值。（2）结核菌素实验（PPD实验）实验方法：TST法选择左侧前臂曲侧中上三分之一处，0.1ml（5IU）皮内注射，用26号10mm长的一次性短斜面的针头和1ml注射器，注射后应能产生凸起的皮丘，边界清楚，上面可以看见明显的小凹。实验后48-72小时看结果。实验结果1、通过ELISA法对三组人群进行结核菌检测的阳性率的比较，结果分别为肺结核组与肺炎组的P值＜0.01，肺结核组与正常对照组的分析结果P值＜0.01，在正常组与肺炎组的对照结果P值＞0.05。其中肺结核组与肺炎组比较的特异度和灵敏度分别为92.5％和80％，肺结核组和正常组比较的灵敏度和特异度分别为92.5％和90％。说明肺结核病患者与肺炎组和正常组比较均有统计学意义，而肺炎组与正常组比较没有统计学意义。2、通过皮试法（TST法）进行结核菌素实验对三组人群结核菌阳性率的比较得出的结果。肺结核组与肺炎组的P值＞0.05，无统计学意义，灵敏度为95％，特异度仅为5％；肺结核组与正常对照组的比较中P＜0.01，有统计学意义，灵敏度和特异度分别为95％和100％；肺炎组和正常对照组P值＜0.01，有统计学意义。结论本次实验通过两种实验方法对三组人群进行了结核菌感染情况的检验及对比，并对检验结果进行了统计学分析，对该实验的可行性给予了明确表述，实验结果表明ELISA实验法在各组人群的对照中灵敏度特异度均普遍高于PPD实验方法，并且在肺结核和肺炎的鉴别诊断中有统计学意义，说明该实验在临床中对肺结核的鉴别诊断是有价值的。