论文摘要
轮状病毒（Rotavirus，RV）为呼肠孤病毒科，轮状病毒属，已被确认为是引起全世界婴幼儿急性胃肠炎最常见的病因。在成人中，轮状病毒同样也会引起急性腹泻，其中成人腹泻轮状病毒（ADRV）是我国洪涛院士于1983年首先发现的一种人B组轮状病毒，它在我国许多地区曾引起大规模以成人为主的霍乱样腹泻的暴发流行。人B组轮状病毒感染性、传播强度、引起的临床症状等都很严重，远远超出A组轮状病毒，因而引起国内外学者的广泛重视和研究。本文研究体外扩增到人B组轮状病毒WH-2株vp7基因的ORF区，所构建的重组体pGEX-KG-VP7经IPTG诱导，SDS-PAGE分析，表达了pGEX-KG-VP7融合蛋白并制备了多克隆抗血清，并对初步纯化的蛋白做了Western-blot鉴定，结果在预测的相应分子量处得到一条特异的反应带，从而证实该融合蛋白具有良好的免疫学活性。因此所表达的蛋白和制备的抗体不但为研究结构与功能提供了物质基础也可用于建立人GBRV的ELISA方法，为GBRV所引起的疾病预防、诊断和治疗等流行病学研究和临床诊断奠定了基础，具有重要实际应用价值。具体研究内容如下：第一章全面概述了B组轮状病毒的形态结构、理化性质、基因组结构及编码的蛋白质、体外培养、流行病学、实验室检测及临床诊断与治疗等方面的研究进展。第二章将VP7结构蛋白的基因克隆到pGEX-KG载体上并进行了诱导表达纯化与多克隆抗体制备。即从含有人B组轮状病毒WH-2株全长vp7基因的pUCmT-vp7重组质粒上扩增出人B组轮状病毒WH-2株vp7基因ORF区，将扩增产物插入融合表达载体pGEX-KG中构建重组pGEX-KG-VP7质粒。将重组质粒转化入大肠杆菌BL21用IPTG诱导，SDS-PAGE分析显示表达了相对分子量为53.4kDa的pGEX-KG-VP7融合蛋白。将pGEX-KG-VP7融合蛋白作为抗原，免疫新西兰兔，制备了多克隆抗体。制备的抗血清经同样诱导表达的表达载体pGEX-KG表达产物吸收后1∶500倍稀释后用Western Blot分析，与53.4kDa的pGEX-KG-VP7融合蛋白获得特异性显色信号，从而证实该融合蛋白具有良好的免疫学活性。