论文题目: 人胎肝来源PACT等重要功能基因的基因打靶研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 细胞生物学
作者: 李力
导师: 贺福初,杨晓
关键词: 基因打靶,胚胎干细胞
文献来源: 中国人民解放军军事医学科学院
发表年度: 2005
论文摘要: 肝脏是人体内多种物质代谢的主要器官,具有重要的生理功能。4-6月孕龄的人胎肝还是造血、免疫系统干祖细胞的主要来源,其中可能存在大量具有重要功能的新基因。本室通过胎肝大规模cDNA测序已经建立了22周孕龄人胎肝基因表达图谱,同时正在进行从胎肝中大规模发掘重要功能新基因的探索,包括PACT、HPO、CKIP-1、NPDC-1、LMBP等。 基因打靶技术是一种通过同源重组按预期方式对靶基因进行定点修饰而改变生物活体遗传信息,进而观察相应基因功能的实验手段。应用此技术,我们共构建成功了上述5种基因的打靶载体,并将打靶载体导入小鼠胚胎干细胞,筛选获得了PACT、HPO、CKIP-13种基因的中靶细胞。各自的基因型均已经过PCR和Southern印迹法鉴定。通过囊胚显微注射技术,我们获得了PACT、HPO、CKIP-13种基因的嵌合体小鼠。其中HPO、CKIP-1这2种基因的嵌合体小鼠不能将突变等位基因遗传至子代。而PACT嵌合体小鼠中的突变等位基因可以遗传至子代,获得了可存活、可繁殖、表型正常的PACT杂合体小鼠。将PACT杂合体小鼠自交,在子代中未发现PACT纯合体小鼠。根据野生型与杂合型小鼠数目约1∶2的比例,推测其可能在胚胎期纯合致死。 我们对PACT杂合体小鼠自交子代做了大量的胚胎期追踪分析,发现PACT纯合体基因敲除小鼠在胚胎期6.5至7.5天死亡,胚胎发育停滞,原肠形成失败。这揭示了PACT在高等动物早期胚胎发育过程中不可或缺的重要性。通过RT-PCR显示,7.5天的PACT纯合体基因敲除胚胎中,p53的靶基因p21、Mdm2的mRNA水平显著升高。因为PACT在体外实验中可以强烈的抑制p53的转录活性,所以我们推测PACT的缺失可能导致p53转录活性的失控,其下游基因过度表达而导致胚胎期致死效应。目前,更进一步的表型分析和死亡机制研究正在进行中。
论文目录:
常用缩略名词
中文摘要
英文摘要
引言
第一部分：PACT基因敲除导致胚胎早期致死
前言
第一节：PACT的小鼠基因组噬菌体文库筛选
第二节：PACT基因打靶载体的构建
第三节：PACT中靶细胞的筛选
第四节：PACT基因敲除小鼠的培育及分析
讨论
第二部分：HPO基因打靶中靶细胞的获得
前言
第一节：HPO的小鼠基因组噬菌体文库筛选
第二节：HPO基因打靶载体的构建
第三节：HPO中靶细胞的筛选
讨论
第三部分：CKIP-1基因打靶中靶细胞的获得
前言
第一节：CKIP-1的小鼠基因组噬菌体文库筛选
第二节：CKIP-1基因打靶载体的构建
第三节：CKIP-1中靶细胞的筛选
讨论
结论
参考文献
综述
综述一：SR蛋白在不同生物中的缺陷型研究进展
综述二：RNA干涉研究进展及应用
附录
在读期间投稿和发表的文章
在读期间基金申请情况
基因打靶进展表
致谢
发布时间: 2005-09-05
参考文献
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