过亚硝酸盐羟化脱氧鸟苷反应的抑制剂的研究

论文摘要

在平流层中有羟基与二氧化氮作用生成过亚硝酸现象的发现,使得过亚硝酸正逐渐成为环境科学领域日益关注的对象。过亚硝酸根是强氧化剂,具有细胞毒性,它不仅能硝化蛋白质、氧化脂质体,而且也可造成DNA 损伤。在生物体的神经细胞、巨噬细胞、内皮细胞中能够自动地生成过亚硝酸根;而且在急性炎症、动脉硬化、再灌注性肌肉萎缩等病理环境中也有过量过亚硝酸根的存在,并观察到由过亚硝酸根引发的DNA 损伤。过亚硝酸根对DNA 的损伤主要有两种形式:DNA 碱基修饰与DNA 单链断裂。在DNA 的四种脱氧核苷中,脱氧鸟苷最易被修饰,并产生两种修饰产物:8-羟基脱氧鸟苷与8-硝基脱氧鸟苷,其中8-羟基脱氧鸟苷是DNA 氧化损伤指标的生物标志物。8-羟基脱氧鸟苷能引发碱基错配,导致基因突变,继而造成细胞癌变。因此,研究过亚硝酸根的抑制剂,减少其对DNA 的损伤,对治疗由此类损伤引发的疾病将有重要的意义。由于过亚硝酸根化学稳定性差、无市售产品,本论文在比较各种过亚硝酸盐溶液制备方法及保存方法的基础上,选择亚硝酸异戊酯与过氧化氢两相法作为制备方法,并改用粉末状二氧化锰处理未反应完的过氧化氢。实验结果表明:在最适处理条件下,过亚硝酸根的浓度可达0.34 摩尔/升,过氧化氢的去除率达95.49%。在研究过亚硝酸根对脱氧鸟苷损伤的过程中,采用体外实验模拟生理条件下（ pH=7.4, 37℃） 脱氧鸟苷与过亚硝酸根的反应。研究发现当过亚硝酸根浓度在0-2.5 毫摩尔/升的范围内,8-羟基脱氧鸟苷的生成量随过亚硝酸根浓度的增加而增加。最后研究了槲皮素、黄酮、α-萘基黄酮、咖啡酸、维生素C、谷胱甘肽、硫辛酸对此类损伤的抑制效果。实验结果表明,对于由过亚硝酸根引发的脱氧鸟苷损伤,含羟基的化合物（槲皮素、咖啡酸、维生素C）比不含羟基（黄酮、α-萘基黄酮）有更明显的抑制作用;含巯基的物质（谷胱甘肽、硫辛酸）也可有效抑制这类损伤。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 过亚硝酸根的产生
• 1.2 过亚硝酸根的生理作用
• 1.3 过亚硝酸根对DNA 的损伤
• 1.4 天然抑制剂的研究进展
• 1.5 课题研究内容
• 第二章 过亚硝酸盐溶液的制备
• 2.1 过亚硝酸盐溶液的制备方法及检测方法
• 2.2 实验原理及内容
• 2.2.1 实验原理
• 2.2.2 实验内容
• 2.3 实验部分
• 2.3.1 主要试剂和仪器
• 2.3.2 实验试剂制备
• 2.3.3 实验方法
• 2.4 结果与讨论
• 2.5 本章小结
• 第三章 过亚硝酸根对脱氧鸟苷损伤及其抑制
• 3.1 实验方案
• 3.1.1 HPLC-ECD 测定8-OHdG 的标准曲线
• 3.1.2 过亚硝酸根浓度对脱氧鸟苷损伤的影响
• 3.1.3 不同抑制剂的抑制效果
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 主要试剂和仪器
• 3.2.2 实验试剂备
• 3.2.3 实验方法
• 3.3 结果讨论
• 3.4 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间所发表的学术论文
• 致谢