Th1细胞因子的含量对羊胚胎移植受胎率的影响及中药提高受胎率的机理研究

论文摘要

本课题主要探讨Th1型细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-2的含量与胚胎移植受胎率的相关性;研究NO在胚胎附植、发育中的作用及其与细胞因子的相互关系;应用中药“安胎散”促孕保胎,临床验证其提高胚胎移植受胎率的效果,并初步研究其作用机理。本试验以胚胎移植技术为依托,采集胚胎移植当日供体羊和受体羊子宫液、血样,两个情期时采集受体羊血样,ELISA方法检测细胞因子的含量,硝酸还原酶法检测NO的含量。结果显示,无论山羊还是绵羊,返情的受体羊胚胎移植当日子宫液或血浆中Th1型细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-2的含量显著高于受胎羊和供体羊（P<0.05）,而受胎羊胚胎移植当日子宫液或血浆中Th1型细胞因子与供体羊比较无显著差异性（P>0.05）。表明Th1型细胞因子的过度表达,不利于胚胎着床和发育;供、受体羊子宫内环境免疫状态的一致性是胚胎植入受体羊后正常发育的重要条件。山羊受体受胎羊两情期时血浆中的Th1型细胞因子含量低于胚胎移植当日血浆中的Th1细胞因子含量,但差异不显著（P>0.05）,说明随妊娠的进行,Th1型细胞因子水平有所降低,有利于妊娠的进行。山羊和绵羊返情羊胚胎移植当日血浆中NO含量显著高于受胎羊（P<0.05）,提示NO的过度表达,有害于植入的胚胎正常发育,导致胚胎早期丢失。胚胎移植当日山羊受体受胎羊和返情羊血浆中NO含量和各细胞因子含量变化基本一致（图2-1）,说明Th1型细胞因子含量和NO含量相互之间有关系。通过研究我们还发现,受胎羊妊娠40天时血浆中NO含量显著高于胚胎移植当日,却极显著低于同时期的返情羊（P<0.01）,表明随妊娠的发展,NO含量升高是胚胎生长发育的需要,有助于胚胎生长发育,属正常生理现象。 胚胎移植后,将20只受体山羊随机分为中药组和对照组,每组10只;14只受体绵羊也随机分为中药组和对照组,每组7只。于手术后第2日起,将中药“安胎散”添加入精料中饲喂,每只羊每天100g,连用三天。之后,在第7天和第10天以同样剂量和方法再各喂一次。对照组不用药,在相同饲养管理条件下,于40天时统计两组受体羊的两情期受胎率,同时颈静脉采集试验羊血样,检测血浆中Th1细胞因子TNF-α,IFN-γ,IL-2和NO的含量。结果中药组受体羊两个情期后受胎率山羊为90%,绵羊为85.7%,对照组分别为60%和57.1%,经x2检验,中药组受胎率极显著高于对照组受胎率（P<0.01）,表明中药“安胎散”具有较好的保胎效果,用于胚胎移植后的受体羊,可显著提高受胎率。并且对山羊的效果要优于对绵羊的效果,但差异不显著（P>0.05）。中药组血浆中各细胞因子含量显著低于对照组（P<0.05）,NO含量山羊中药组极显著低于对照组（P<0.01）,绵羊中药组NO含量显著低于对照组（P<0.05）,表明“安胎散”应用于移植胚胎后的受体羊,可抑制Th1反应,下调Th1细胞因子的含量;抑制NO的过度合成,利于妊娠的生理过程。

论文目录

• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 试验动物
• 2.1.2 主要试剂及药品
• 2.1.3 主要仪器设备
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 试验动物饲养管理
• 2.2.2 供、受体羊的同期发情处理
• 2.2.3 供体羊超排处理
• 2.2.4 供、受体羊试情配种
• 2.2.5 子宫液样品的采集
• 2.2.6 供、受体羊术后护理
• 2.2.7 移植后受体羊的饲养管理及受胎率的统计
• 2.2.8 受体羊植入胚胎后饲喂中药
• 2.2.9 血样的采集和处理
• 2.2.10 子宫液及血浆样品中细胞因子含量的测定
• 2.2.11 受体羊血浆中NO含量的测定
• 2.2.12 统计分析
• 3 结果
• 3.1 各组细胞因子含量测定
• 3.1.1 各处理组IFN-γ的测定结果
• 3.1.2 各处理组IL-2的测定结果
• 3.1.3 各处理组TNF-α的测定结果
• 3.1.4 山羊受体受胎羊不同时期血浆中各细胞因子含量
• 3.2 一氧化氮（NO）含量测定
• 3.2.1 山羊血浆中NO含量测定结果
• 3.2.2 绵羊血样中NO含量测定结果
• 3.2.3 胚胎移植当日受体羊血浆中NO含量与各细胞因子含量的相互关系
• 3.3 中药“安胎散”应用于受体羊的试验结果
• 3.3.1 应用中药“安胎散”提高胚胎移植受胎率的效果
• 3.3.2 中药“安胎散”对NO含量的影响
• 3.3.3 中药“安胎散”对各细胞因子含量的影响
• 4 讨论
• 4.1 Th1/Th2型细胞因子之间的动态平衡与妊娠
• 4.2 Th1细胞因子的含量对胚胎移植受胎率的影响
• 4.3 供、体羊子宫环境中细胞因子含量的差异对胚胎移植受胎率的影响
• 4.4 受胎羊不同时期血浆中细胞因子含量的变化
• 4.5 NO含量对胚胎移植受胎率的影响
• 4.5.1 胚胎移植受体羊当日血浆中NO含量对胚胎移植受胎率的影响
• 4.5.2 受胎羊血浆中不同时间NO含量的变化
• 4.6 中药“安胎散”提高胚胎移植受胎率的可能机制
• 4.6.1 中药“安胎散”的促孕保胎作用
• 4.6.2 中药“安胎散”的促孕保胎作用的可能机制
• 5 结论
• 参考文献
• 在读期间发表的学术论文
• 作者简历
• 致谢
• 附录
• 不同药物组合对波尔山羊超排效果肋试验研究