bFGF siRNA表达质粒对胶质瘤中STAT3基因抑制作用的研究

论文摘要

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）小分子干扰RNA （siRNA）表达质粒对胶质瘤细胞系U251中STAT3及cyclinD1和bcl-xl的抑制作用,探讨胶质瘤基因治疗的新途径。方法：用优选靶序列siRNA850构建siRNA表达质粒pGPU6/GFP/Neo-shFGF2,然后采用脂质体介导的方法转染入胶质瘤细胞系U251细胞内,用MTT法观察不同质粒用量即3ug、4ug和5ug,脂质体用量1Oul,对胶质瘤细胞系U251细胞的抑制作用,找出抑制效果最好的质粒用量。用最佳质粒用量分别检测转染后不同时间点即24小时、48小时、72小时和96小时的MTT吸收值,观察细胞增值活性。用免疫组化定性（测定转染后24h）及western blot（测定转染后24h、48h、72h三个时间点）相对定量的方法检测转染前后STAT3、cyclinD1和Bcl-xl蛋白表达的变化。结果：1.MTT法显示脂质体用量10ul, bFGF siRNA质粒用量4ug对U251细胞的抑制作用最好。转染后24小时,正常对照组、阴性对照组、实验组的MTT吸收值无显著性差异。转染后48小时和72小时,实验组与正常对照组和阴性对照组相比,均具有显著性差异,表明对细胞增殖具有显著的抑制作用；转染后96小时,实验组与阴性对照组相比具有统计学意义,但与正常对照组相比,无统计学意义。2.免疫组化显示：转染后24小时实验组STAT3、CyclinD1和Bcl-xl在胶质瘤细胞系U251中表达的阳性率较正常对照组降低。转染24小时后,正常对照组STAT3表达（+++）,阳性细胞率为46.27%,实验组表达（+）,阳性细胞率为14.23%,阴性对照组表达（++）,阳性细胞率为28.39%；正常对照组Bcl-Xl表达（+++）,阳性细胞率为51.3%,实验组表达（+）,阳性细胞率为10.56%,阴性对照组表达（++）,阳性细胞率为27.82%；正常对照组CyclinD1表达（+++）,阳性细胞率为48.79%,实验组表达（+）,阳性细胞率为8.89%,阴性对照组表达（++）,阳性细胞率为31.36%。3. western blot结果：用FlourchmeFC2软件分析western凝胶图像可以说明转染后24h、48h、72h均显示STAT3、CyclinD1和Bcl-xl的实验组蛋白条带的AVG值较正常对照组和阴性对照组降低,且质粒的抑制作用48小时最强,其次是72小时,最后是24小时。结论：用优选靶序列siRNA850构建的siRNA表达质粒能够有效抑制细胞内STAT3的活化及其下游分子CyclinDl和Bcl-xl的表达,并抑制胶质瘤细胞系U251的增殖,本实验结论为多基因联合治疗胶质瘤奠定了基础。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 对象和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 综述参考文献
• 致谢