细胞色素P4502C19基因多态性与氯吡格雷抵抗的相关性研究

论文摘要

氯吡格雷是临床常用的抗血小板药物,广泛应用于急性冠脉综合征和经皮冠状动脉介入治疗的抗血小板治疗,氯吡格雷与阿司匹林联用是国际上支架植入术后的标准抗栓治疗方案。然而氯吡格雷的抗血小板作用存在个体差异,部分病人在应用常规剂量的氯吡格雷后仍然发生血栓事件,这种现象定义为氯吡格雷抵抗（clopidogrel resistance,CR）。目前氯吡格雷抵抗的机制尚不十分清楚,环境因素和遗传因素在氯吡格雷抵抗发生过程中起重要作用基因多态性被认为是其中一个重要的机制。氯吡格雷在体内的代谢过程与细胞色素P450 2C19（CYP2C19）密切相关。本研究拟采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）及焦磷酸测序的分析方法,初步阐明CYP2C19基因单核苷酸多态性与CR之间的相关关系。研究方法:本研究共入选1102例住院冠心病患者,给予负荷剂量氯吡格雷600mg或300mg及阿司匹林300mg,服药后6小时（服用氯吡格雷600mg的病人）或24小时（服用氯吡格雷300mg的病人）,用光学比浊法测定20 mol/L的ADP诱导的血小板聚集率,20 mol/L的ADP诱导的血小板聚集率≥70%,定义为CR;<70%则定义为氯吡格雷非抵抗（Non-clopidogrel resistance,NCR）。所有患者均采取外周血白细胞提取基因组DNA,采用PCR-RFLP或焦磷酸测序的方法,检测所有入选研究对象细胞色素P450 2C19基因标签单核苷酸多态性（Tag Single Nucleotide Polymorphism,TagSNP）的基因型和等位基因分布。结果:（1）入选患者CR的发生率为15.88%。（2）细胞色素P450 2C19 rs4244285位点（681G>A）多态性在CR组和NCR组均存在GG、GA和AA三种基因型,在CR组和NCR组分别为28.6%、44.5%、26.9%和46.1%、45.3%、8.6%。细胞色素P450 2C19 rs4244285的A等位基因在CR组的基因型频率明显高于NCR组,与G等位基因携带患者相比,A等位基因携带患者发生CR的危险性显著增加（OR=2.123,95%CI:1.6842.675,P<0.001）。（3） CYP2C19基因rs7916649、rs3758581、rs11528090、rs4304697、rs3814637、rs10786172、rs4986893及rs12248560单核苷酸多态位点与氯吡格雷抵抗的发生无显著相关性（P >0.05）。结论:CYP2C19基因rs4244285位点（681G>A）是CR独立的危险因素。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 文献回顾
• 1.氯吡格雷简介
• 2.氯吡格雷抵抗的定义及临床意义
• 3.血小板聚集率的测定方法
• 4.AR 和 CR 的机制
• 1. 材料与方法
• 1.1 研究对象及材料
• 2. 实验方法
• 2.1 临床资料的采集及随访
• 2.2 处理方法及测定指标
• 2.3 连锁不平衡特征和标签SNP的选择
• 2.4 CYP2C19 基因标签SNP基因型检测
• 2.5 统计学分析
• 3. 实验结果
• 3.1 基因组DNA电泳检测及标签SNP的基因定型结果
• 3.2 研究对象的基础临床特征
• 3.3 Hardy–Weinberg平衡检验
• 3.4 CYP2C19基因标签SNP的连锁不平衡结构分析
• 3.5 CYP2C19基因标签SNP的基因型及等位基因在CR组与NCR组间的分布
• 4. 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢