首页> 正文

长角血蜱卵黄发生及其激素调控

2020-11-23阅读(933)

长角血蜱卵黄发生及其激素调控

论文摘要

蜱类是专性吸血的外寄生动物,传播多种人、畜疾病且具极强的繁殖力,对人类健康和畜牧业造成极大危害。蜱类生殖生理学是国际上研究的热点领域,其中卵黄发生及其调控是该领域的核心内容。本研究以广泛分布于我国的长角血蜱Haemaphysalis longicornis Neumann为研究对象,运用组织培养、生物化学、分析化学、免疫细胞化学、酶联免疫分析、气相色谱/质谱和质量肽谱等现代生物学及其交叉学科的研究方法,在纯化出长角血蜱Vn基础上,对Vn与Vg的理化性质、蛋白序列分析、Vg合成组织与合成细胞定位、Vg合成分泌动态以及两类不同性质激素的作用进行了系统研究,对于深入阐明蜱类卵黄发生及其调控机理,揭示蜱类生殖生物学规律、适应对策和生理调节机制具有重要的科学意义。 长角血蜱Vn只有一种,是一种血糖脂复合蛋白,等电点为5.4,相对分子质量为370KD,由8个亚基组成,亚基相对分子质量分别为112KD、103KD、80KD、78KD、71KD、68KD、62KD和52KD。Vn亚基P1和P3的N-端序列测定表明,P1为N-端封闭,P3 N-端15个氨基酸顺序为YSVLPVYLPCFYEKC。本文首次将MALDI-TOF-MS技术应用于Vn蛋白序列的研究,获得8个Vn亚基的肽质量指纹图谱（PMF）,将所得PMF数据在线进行比对,检索NCBI数据库。确定Vn各亚基为未被NCBI数据库所纪录的新蛋白。 应用GC/MS技术鉴定Vn糖分与脂类,结果表明,Vn的主要糖分为甘露糖和葡萄糖,另含微量的鼠李糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、半乳糖、山梨糖、N-乙酰葡糖胺和N-乙酰半乳糖胺;Vn脂类的主要脂肪酸成分为（Z）-13-十八碳烯酸和十八烷酸,另含少量14-甲基十五烷酸和8,11-十八碳二烯酸。 长角血蜱脂肪体由营养细胞构成,聚集细胞常伴随出现。在卵黄发生期,营养细胞含有大量与蛋白合成有关的细胞器。电泳结果显示,脂肪体蛋白具有多样性,成分复杂。饥饿期,脂肪体蛋白成分相对较少。吸血初期,蛋白成分有所增加,交配期无明显变化,饱血期蛋白成分增多。产卵初期,部分蛋白带消失。在雌蜱饱血后至产卵前阶段,脂肪体内蛋白成分最丰富。通过免疫印迹实验和免疫电镜观察,确证脂肪体是Vg的合成位点,中心区脂肪体与外周区脂肪体的营养细胞均合成Vg。 雌蜱吸血后血淋巴蛋白成分逐渐增加,饱血期蛋白成分最多,产卵初期有所减少。

论文目录

  • 缩略语
  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 综述：蜱类卵黄发生研究进展
  • 1 蜱类的卵黄发生
  • 1.1 卵黄蛋白和卵黄原蛋白
  • 1.2 卵黄原蛋白的合成
  • 1.3 卵黄原蛋白的吸收
  • 2 蜱类卵黄发生的激素调控
  • 2.1 蜱类的激素
  • 2.2 软蜱
  • 2.3 硬蜱
  • 3 展望
  • 第二章 引言
  • 第三章 材料与方法
  • 1 长角血蜱的采集与喂养
  • 2 卵的收集与粗提
  • 3 卵黄蛋白的纯化
  • 4 卵黄蛋白等电点的测定
  • 5 卵黄蛋白的糖脂蛋白染色
  • 6 卵黄蛋白亚基N-端序列测定
  • 7 卵黄蛋白的双向电泳与MALDI-TOF-MS分析
  • 8 GC／MS法分析卵黄蛋白所含糖分
  • 9 GC／MS法分析卵黄蛋白脂类成分
  • 10 Vn多克隆抗体的制备
  • 11 免疫印迹（Western-Blot）
  • 12 间接竞争法ELISA
  • 13 卵黄原蛋白合成的免疫电镜细胞定位
  • 14 卵巢中可溶性蛋白含量测定
  • 15 电泳分析
  • 16 局部点滴与注射
  • 17 体外组织培养
  • 18 主要仪器设备
  • 19 主要试剂
  • 第四章 卵黄蛋白的纯化与理化性质分析
  • 1 前言
  • 2 材料与方法
  • 3 结果
  • 3.1 卵黄蛋白的提取与纯化
  • 3.2 卵黄蛋白是一种含血红素的糖脂蛋白
  • 3.3 卵黄蛋白的相对分子质量与亚基组成
  • 3.4 卵黄蛋白的等电点
  • 3.5 卵黄蛋白亚基N-端测序
  • 3.6 卵黄蛋白双向电泳
  • 3.7 卵黄蛋白双向电泳图谱的软件分析
  • 3.8 卵黄蛋白亚基MALDI-TOF-MS鉴定
  • 3.9 卵黄蛋白亚基鉴定结果
  • 3.10 卵黄蛋白糖分的GC／MS鉴定
  • 3.11 卵黄蛋白脂类的脂肪酸分析
  • 4 讨论
  • 第五章 卵黄原蛋白合成位点的免疫学研究
  • 1 前言
  • 2 材料与方法
  • 3 结果
  • 3.1 ELISA检测抗体效价
  • 3.2 免疫斑点法检测抗体特异性
  • 3.3 免疫印迹（Western-Blot）检测组织
  • 3.4 脂肪体和中肠的超微结构
  • 3.5 免疫胶体金电镜定位
  • 4 讨论
  • 第六章 卵黄原蛋白的合成与激素作用
  • 1 前言
  • 2 材料与方法
  • 3 结果
  • 3.1 不同发育期脂肪体蛋白成分的动态变化
  • 3.2 不同发育期血淋巴蛋白成分的动态变化
  • 3.3 卵黄原蛋白的鉴定
  • 3.4 不同发育期血淋巴中卵黄原蛋白含量的动态变化
  • 3.5 保幼激素Ⅲ对血淋巴中卵黄原蛋白含量的作用
  • 3.6 20-羟基蜕皮酮对血淋巴中卵黄原蛋白含量的作用
  • 4 讨论
  • 第七章 卵发育与激素作用
  • 1 前言
  • 2 材料与方法
  • 3 结果
  • 3.1 不同发育期卵巢蛋白含量的动态变化
  • 3.2 不同发育期卵巢蛋白成分的动态变化
  • 3.3 法尼醇对饱血雌蜱卵巢蛋白含量的影响
  • 3.4 法尼醇对饱血雌蜱卵巢蛋白成分的影响
  • 3.5 法尼醇对饱血雌蜱卵巢中卵黄蛋白含量的影响
  • 3.6 20-羟基蜕皮酮对饱血雌蜱卵巢蛋白含量的影响
  • 3.7 20-羟基蜕皮酮对饱血雌蜱卵巢中卵黄蛋白的影响
  • 4 讨论
  • 第八章 总结
  • 参考文献
  • 发表的论文
  • 致谢
  • 附录

    • 相关论文文献

    • [1].河北承德云枫岭地区长角血蜱种群动态调查分析[J]. 河北师范大学学报(自然科学版) 2020(01)
    • [2].美国多个州发现能传播外来疾病的媒介长角血蜱(2017年8月至2018年9月调查情况)[J]. 疾病监测 2019(09)
    • [3].长角血蜱饥饿雌成蜱转录组测序及分析[J]. 中国公共卫生 2019(07)
    • [4].长角血蜱雌雄个体间共生菌多样性比较[J]. 中国病原生物学杂志 2018(05)
    • [5].淮安地区寄生长角血蜱中携带病原体情况调查[J]. 现代预防医学 2019(16)
    • [6].小五台山地区长角血蜱若虫日间寻求节律[J]. 中国人兽共患病学报 2019(08)
    • [7].伊维菌素对长角血蜱生长发育及生殖的影响[J]. 应用昆虫学报 2019(04)
    • [8].长角血蜱野外种群对常用杀虫剂相对敏感基线和诊断剂量研究[J]. 中国媒介生物学及控制杂志 2019(01)
    • [9].长角血蜱两性生殖株和孤雌生殖株幼蜱发育零点及有效积温的研究[J]. 国际医学寄生虫病杂志 2015(03)
    • [10].基于mt COI基因序列的DNA条形码技术在江苏沿江长角血蜱鉴定中的应用[J]. 江苏预防医学 2018(02)
    • [11].辽宁省东部山区长角血蜱中SFGR DNA的检测和序列分析[J]. 中国病原生物学杂志 2018(06)
    • [12].图们江流域中朝俄边境地区长角血蜱中SFTS病毒监测分析[J]. 中华疾病控制杂志 2019(02)
    • [13].河南省不同地理区划长角血蜱对宿主选择性的研究[J]. 河南预防医学杂志 2018(09)
    • [14].淮安市长角血蜱遗传多样性的线粒体基因COⅠ分析[J]. 职业与健康 2019(08)
    • [15].基于线粒体基因COI的长角血蜱遗传多样性分析[J]. 中国病原生物学杂志 2016(03)
    • [16].长角血蜱实验室繁殖规律研究与种群的建立[J]. 中国预防医学杂志 2010(02)
    • [17].长角血蜱谷胱甘肽过氧化物酶的克隆与原核表达(英文)[J]. 中国人兽共患病学报 2012(09)
    • [18].吉林省延边地区自然生境内蜱种类的调查[J]. 国际医学寄生虫病杂志 2015(01)
    • [19].河南省蜱种类和地理分布及季节消长调查[J]. 中国媒介生物学及控制杂志 2015(01)
    • [20].安徽省发热伴血小板减少综合征部分流行地区蜱类分布调查[J]. 安徽预防医学杂志 2020(04)
    • [21].北京房山地区长角血蜱越冬习性的初步观察[J]. 黑龙江畜牧兽医 2015(08)
    • [22].长角血蜱雌蜱不同发育时期唾液腺蛋白的组成分析[J]. 天津师范大学学报(自然科学版) 2015(03)
    • [23].长角血蜱酸性磷酸酶全长cDNA的克隆与原核表达及其表达产物的酶活性分析[J]. 中国兽医科学 2011(05)
    • [24].长角血蜱不同发育期盾窝超微结构的比较研究[J]. 昆虫学报 2010(05)
    • [25].猫长角血蜱寄生的诊治报告[J]. 养殖技术顾问 2009(02)
    • [26].沈阳地区蜱携带新型布尼亚病毒的检测[J]. 疾病监测 2014(05)
    • [27].一起药浴驱治蜱引起羊中毒的治疗报告[J]. 山东畜牧兽医 2016(12)
    • [28].上海市犬体表媒介蜱寄生情况初步调查[J]. 中国血吸虫病防治杂志 2012(05)
    • [29].莱姆病螺旋体感染对蜱的4个功能基因的转录影响[J]. 畜牧与兽医 2011(03)
    • [30].不同饲喂方式和温度对长角血蜱甘肃株生物学特性的影响[J]. 动物医学进展 2010(05)

    标签：;  ;  ;  ;  ;  ;  ;  ;  ;  ;  ;  

    长角血蜱卵黄发生及其激素调控
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5