论文摘要
目的:观察浆细胞样树突状细胞（plasmacytoid dendritic cells, pDCs）在慢性乙型肝炎病人体内的特点,分析其与临床病程的关系,初步探讨pDCs在乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）感染发病机制中的作用,为树突状细胞（dendritic cells, DCs）疫苗的研制提供实验依据。方法:（1）应用免疫磁珠分选技术纯化7例慢性乙型肝炎病人和4例健康人外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）中的pDCs,体外加入CpG ODN2216或CpG ODN2006刺激剂共培养24h后,应用流式细胞仪分析刺激前后pDCs表面共刺激分子的表达情况,同时通过ELISA检测培养上清中细胞因子IFN-α,IL-12和IL-10的产生情况,从而初步鉴定pDCs的免疫学特性。（2）应用流式细胞仪检测20例慢性乙型肝炎病人和15例健康人外周血DC亚群和淋巴细胞亚群频率,并使用CpG ODN2216刺激其PBMCs,然后利用ELISA技术检测培养上清中IFN-α含量,分析HBV慢性感染病人外周血pDCs频率、数量和功能的变化及其与临床病程的关系。（3）应用免疫组化技术和流式细胞分析技术等观察11例慢性重型乙型肝炎病人和4例健康人外周血和肝脏浸润淋巴细胞（Liver infiltrating lymphocytes, LILs）中pDCs的频率、数量和功能的差异。结果:（1）应用免疫磁珠分选技术可以得到纯度大于95%的pDCs。CpG ODN2216可以刺激纯化的pDCs产生大量的IFN-α,而CpG ODN2006刺激pDCs高表达共刺激分子CD80、CD86、CD40和CD83;与健康人比较,CpG ODN2216刺激慢性乙肝病人纯化的pDCs产生的IFN-α的能力明显降低。（2）与健康人比较,慢性乙型肝炎病人外周血中pDCs和NK细胞频率明显下降,并且CpG ODN2216刺激PBMCs产生IFN-α的能力也显著降低;相关性分析表明,慢性乙肝病人pDCs频率与ALT呈明显负相关,但与血浆病毒载量无明显相关。（3）慢性重型乙型肝炎病人LILs中pDCs百分含量明显高于PBMCs,免疫组化检测也显示慢性重型乙型肝
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