热休克蛋白70、葡萄糖调节蛋白94和免疫球蛋白G在胎盘肿瘤中的表达、共定位及其意义的研究

论文摘要

热休克蛋白（ heat shock protein,HSP ）是细胞受到各种刺激时产生的一类具有重要生理功能和高度保守的多肽类蛋白质分子家族,普遍存在于原核和真核生物细胞中,在应激状态下可被诱导表达。在哺乳动物的细胞中,热休克蛋白被分为Hsps和Grps,HSP70和GRP94分别是他们中的一员,在正常细胞的生长和发展的过程中,HSP70和GRP94持续地处于低表达状态,但当处于应激状态时将持续高表达。研究已经发现在肿瘤细胞中在没有任何刺激下HSP70和GRP94都将高表达并且与肿瘤的发生发展有关系。在过去免疫球蛋白G被认为是人类免疫系统最普遍和最重要的蛋白且只能由分化成熟的B淋巴细胞分泌,最近的研究发现一些人类肿瘤也能产生IgG。HSP70在葡萄胎中的表达以及HSP70与IgG在肝癌共定位的关系已有相关文献的报道,但关于HSP70,GRP94和IgG在胎盘肿瘤的表达以及HSP70和GRP94分别与IgG的关系尚未见报道。本课题研究目的:（1）.探讨HSP70,GRP94和IgG在胎盘肿瘤中的表达及意义。（2）.研究HSP70,GRP94与IgG的共定位关系及其意义,为肿瘤细胞内免疫机制的存在提供一定的依据。方法: （1）.利用免疫组化研究HSP70,GRP94和IgG在胎盘肿瘤中的表达,同时利用Image-ProPlus进行抗原表达量的分析。（2）.利用免疫荧光双标,激光共聚焦显微镜分析并初步证实在胎盘肿瘤组织和绒毛膜癌细胞系中存在HSP70,GRP94和IgG的共定位。（3）.利用RT-PCR证明HSP70,GRP94和IgG的基因表达。结果:免疫组化的结果显示39例葡萄胎有31例表达HSP70,阳性率为79.4%,有34例表达GRP94,阳性率为87.1%,有35例表达IgG,阳性率为89%。20例绒毛膜癌中有15例表达HSP70,阳性率为75%,有16例表达GRP94,阳性率为80%,有18例表达IgG,阳性率为90%。HSP70在胞浆胞核中均表达,主要表达在胞核中,GRP94和IgG主要表达在胞浆中,而且HSP70,GRP94在绒毛膜癌中细胞的表达要比在葡萄胎中细胞的表达强（P = 0.03,P = 0.04）,同时也发现在葡萄胎中HSP70在细胞滋养层细胞比合体滋养层细胞表达强（P< 0.01）,GRP94和IgG是合体滋养层细胞比细胞滋养层细胞表达要强（P< 0.01）。另外还发现在20例绒毛膜癌中HSP70,GRP94和IgG表达都比癌旁组织表达强（P< 0.01）,这些结果表明HSP70,GRP94的表达可能与肿瘤的良恶性程度有关系。59例胎盘肿瘤组织中42例有HSP70和IgG的共表达,48例有GRP94和IgG的共表达,通过免疫荧光发现在部分胎盘肿瘤细胞中可见HSP70,GRP94分别与IgG的共定位,为了排除他们可能来自非特异吸收,我们在体外培养了绒毛膜癌细胞,也发现存在HSP70,GRP94和IgG的共定位,同时利用RT-PCR证明了HSP70,GRP94和IgG存在基因的表达。结论:HSP70,GRP94在胎盘肿瘤的表达与胎盘肿瘤的分化程度有关系,初步证实了HSP70,GRP94和IgG在胎盘肿瘤中的共定位关系,可能与胎盘肿瘤的生存和发展有关。

论文目录

缩略语表

中文摘要

英文摘要

前言

文献回顾

1. 热休克蛋白70 （HSP70）的研究进展

2 葡萄糖调节蛋白94（GRP94 或GP96）的研究进展

3. 免疫球蛋白G在肿瘤中的研究进展

正文

实验一、HSP70,GRP94 和免疫球蛋白G在胎盘肿瘤细胞中的表达及意义

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

实验二、HSP70,GRP94 和免疫球蛋白G在胎盘肿瘤细胞中共定位及意义