菝葜提取物抗卵巢癌的多重效应及其分子机制

论文摘要

目的:研究菝葜提取物抗卵巢癌细胞的作用,并从细胞水平和分子水平讨探其发挥该作用的机制。方法:用菝葜提取物对卵巢癌细胞进行干预。首先,采用CCK-8,EdU法以及克隆形成实验对细胞的活性、增殖、克隆形成、以及提取物与传统药物联用后的化疗效应进行考察;接着,分别采用IP单染法和Annexin V-FITC/PI双染法,经流式细胞术检测药物处理后细胞的周期比例和细胞的凋亡特征;然后,通过Transwell小室法考察药物处理后细胞的迁移能力;最后,对NF-κB及多种蛋白的表达水平进行了Western blot分析,并用免疫荧光染色法观察NF-κB在细胞中的定位。结果:菝葜正丁醇提取物可有效抑制卵巢癌细胞的活性、增殖能力和克隆形成能力,抑制作用呈浓度依赖性,并且,该提取物对传统化疗药物顺铂和阿霉素具有增敏作用。流式细胞术分析显示,菝葜正丁醇提取物将A2780细胞周期阻滞在G2/M期并诱导细胞凋亡。细胞迁移实验显示菝葜正丁醇提取物干预后,细胞的迁移能力减弱。Western blot分析发现,药物可能通过抑制AKT的活性阻滞NF-κB的核转录,从而使NF-κB的活性受到抑制,进而抑制其下游因子Bcl-2,Bcl-xL,XIAP,cIAP-1,ICAM-1,VEGF和Cyclin D1。实验结果还显示菝葜正丁醇提取物可活化Capase-3、PARP和Bax因子。结论:上述实验结果表明,菝葜正丁醇提取物在体外可从多方面发挥抗卵巢癌的作用,抑制NF-κB的活性可能是其抗卵巢癌作用的分子机制之一,这为进一步研究菝葜抗卵巢癌的作用打下了理论基础。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩写词表
• 前言
• 第一部分 菝葜提取物抗卵巢癌细胞的多重效应
• 1. 材料与仪器
• 1.1 药材
• 1.2 细胞株
• 1.3 试剂
• 1.4 仪器与设备
• 2. 实验方法
• 2.1 试剂的配备
• 2.2 仪器的清洗、消毒
• 2.3 细胞培养
• 2.4 MTT 法测细胞活性
• 2.5 CCK-8 法测细胞活性
• 2.6 CCK-8 法测菝葜提取物的增敏作用
• 2.7 EdU 法测细胞增殖能力
• 2.8 克隆形成试验检测细胞克隆形成能力
• 2.9 PI 单染法测细胞周期进程
• 2.10 Annexin V-FITC/PI 双染法检测细胞凋亡
• 2.11 Transwell 小室法测细胞的迁移能力
• 2.12 数据处理
• 3. 实验结果
• 3.1 菝葜提取物对多种肿瘤细胞活性的影响
• 3.2 菝葜提取物对卵巢癌细胞活性的影响
• 3.3 菝葜正丁醇提取物对卵巢癌细胞抑制作用的时间依赖性
• 3.4 菝葜正丁醇提取物对传统药物化疗敏感性的影响
• 3.5 菝葜正丁醇提取物对A2780 细胞增殖能力的影响
• 3.6 菝葜正丁醇提取物对A2780 细胞克隆形成的影响
• 3.7 菝葜正丁醇提取物对A2780 细胞周期的影响
• 3.8 菝葜正丁醇提取物对A2780 细胞凋亡的影响
• 3.9 菝葜正丁醇提取物对A2780 细胞迁移能力的影响
• 4. 讨论
• 第二部分 菝葜正丁醇提取物抗卵巢癌的分子机制
• 1. 材料与仪器
• 1.1 材料
• 1.2 试剂
• 1.3 抗体
• 1.4 仪器与设备
• 2. 实验方法
• 2.1 Wersten blot 法检测各种蛋白的表达
• 2.2 荧光免疫实验检测细胞内NF-κB-p65 的定位
• 3. 实验结果
• 3.1 菝葜正丁醇提取物对NF-κB 活化的影响
• 3.2 菝葜正丁醇提取物对NF-κB 的核转入的影响
• 3.3 菝葜正丁醇提取物对NF-κB 上游因子AKT 活性的影响
• 3.4 菝葜正丁醇提取物对NF-κB 下游抗凋亡蛋白表达的影响
• 3.5 菝葜正丁醇提取物对NF-κB 下游因子ICAM-1、VEGF、Cyclin D1 的影响
• 3.6 菝葜正丁醇提取物对Bax、Capase-3 和PARP 的影响
• 4. 讨论
• 结论与创新
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 附录