RPM对大鼠肾缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

论文摘要

目的:探讨雷帕霉素（RPM）对大鼠肾缺血再灌注损伤的疗效及机制。揭示RPM对大鼠肾缺血再灌注损伤的作用机制并寻求治疗肾缺血再灌注损伤的有效途径。方法:第一部分:从生化检测和细胞形态学水平,观测RPM对肾缺血再灌注大鼠肾的功能和超微结构的影响。30只雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术（sham）组（切除右肾,分离左肾动脉,不阻断血流,灌胃给等量生理盐水）、手术（IR）组（切除右肾,分离左肾动脉,阻断血流,缺血前灌胃给等量生理盐水）、药物（RPM+IR）组(切除右肾,分离左肾动脉,阻断血流,缺血前灌胃给药雷帕霉素（4mg/（Kg﹒d）×3d,最后一次术前2 h灌胃）。大鼠急性缺血性肾损伤模型为切除右肾,分离左肾动脉,阻断血流45 min,再灌注24 h,观察肾功能和肾组织超微结构改变。第二部分:从基因蛋白表达水平,观测RPM对肾缺血再灌注大鼠肾的凋亡基因蛋白表达的影响。Wistar大鼠81只,随机分为三组:假手术组（切除右肾,分离左肾动脉,不阻断血流,缺血前灌胃给等量生理盐水）、手术组（切除右肾,分离左肾动脉,阻断血流,缺血前灌胃给等量生理盐水）、药物组（切除右肾,分离左肾动脉,阻断血流,缺血前灌胃给药雷帕霉素（4mg/（Kg﹒d）×3d,术日术前2h灌胃）,术后给药至各个观察日）,缺血组又按缺血再灌注时间分为再灌注后0 h,24 h ,48 h,72 h,4个观察时相,每个观察组相9只。采用HE染色分析肾组织病理损伤程度,TUNEL法检测肾组织细胞凋亡率,免疫组化SABC法检测Fas,bcl-2蛋白表达的变化。结果:第一部分:肾缺血再灌注组血肌酐（168±37）μmol/L、血尿素氮（22±6）mmol/L,雷帕霉素组血肌酐（113±17）μmol/L、血尿素氮（13.8±2.3）mmol/L;2组比较差异有显著性意义（P<0.05）。电镜:手术组肾小管管腔被大量坏死脱落细胞碎片堵塞,上皮细胞胞浆内脂滴堆积,细胞发生凋亡迹象;药物组肾小管超微结构损害轻微。第二部分:手术组肾组织细胞凋亡率显著升高（P<0.05）;药物组比手术组细胞凋亡率显著降低（P<0.05）。Fas蛋白在假手术组呈阴性表达,手术组再灌注0 h有少量表达,再灌注24,48及72 h呈阳性表达,以48 h时达高峰（P<0. 05）;主要表达在皮质肾小管;药物组肾组织Fas蛋白水平显著低于手术组（P<0.05）。bcl-2蛋白在假手术组呈阴性表达,手术组再灌注0 h有少量表达,再灌注24,48及72 h呈阳性表达,48 h达高峰（P<0. 05）;皮质肾小管表达为主;药物组肾组织bcl-2蛋白水平显著高于手术组（P<0.05）。HE染色可见手术组肾小管上皮细胞有不同程度的片状坏死灶和炎性细胞浸润,药物组肾组织损伤明显减轻。结论:第一部分:RPM对大鼠肾缺血再灌注损伤时肾功能和肾组织超微结构有明显保护作用。第二部分:RPM对大鼠肾缺血再灌注损伤所致的肾损害具有显著的保护作用,该作用可能与RPM下调Fas,上调bcl-2蛋白表达抑制细胞凋亡有关。总结:RPM对肾缺血再灌注大鼠有明确的保护作用,是探索临床预防和减轻肾缺血再灌注损伤的有效方法之一。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 主要仪器设备和常用试剂的配制
• 第一部分：RPM 对肾缺血再灌注大鼠肾脏功能和形态的保护作用研究
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 第二部分：RPM 对大鼠肾缺血再灌注损伤肾脏保护作用的机制研究
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 结论
• 图片
• 文献综述
• 致谢
• 攻读学位期间发表的文章