本文主要研究内容
作者李慧慧（2019）在《Kr-h1磷酸化及其在保幼激素信号转导中的功能》一文中研究指出：保幼激素(juvenile hormone,JH)是一种由昆虫咽侧体合成的倍半萜类激素,控制昆虫发育、变态和生殖。尽管JH核受体Methoprene-tolerant(Met)的鉴定和解析加快了JH分子作用机制的探索,然而对JH信号通路的作用机理还有待深入研究。飞蝗(Locusta migratoria)是世界性的重要农业害虫,有很强的繁殖能力。JH调控飞蝗成虫羽化后第一个促性腺周期内的卵黄发生、卵巢发育以及卵成熟。因此,飞蝗是研究JH信号通路分子机制的理想模型。Krüppel homolog 1(Kr-h1)是JH的早期响应基因,在JH抑制幼虫或若虫变态及促进成虫生殖中发挥关键作用。Kr-h1转录受JH受体复合体(Met/Tai)激活,Kr-h1也直接调控靶标基因的转录。课题组前期研究发现,JH诱导Kr-h1的磷酸化,但触发其磷酸化的信号通路及其在基因转录调控中的作用有待阐明。本论文研究以飞蝗为实验模式,利用细胞生物学、分子生物学和遗传学等方法,探究Kr-h1的磷酸化修饰及其生物学功能。重点研究内容有三个:(1)确定Kr-h1磷酸化位点,鉴定触发Kr-h1磷酸化的蛋白激酶;(2)分析正常发育以及JH剥夺和诱导条件下Kr-h1磷酸化的动态变化,明确Kr-h1磷酸化修饰对JH的依赖,鉴定JH诱导Kr-h1磷酸化的信号转导途径;(3)解析Kr-h1磷酸化对靶基因转录的调控能力,阐明Kr-h1磷酸化在昆虫变态和生殖中的功能。通过构建突变载体,利用Western blot和IP实验筛选到Kr-h1可能的磷酸化位点Ser154。通过制备Ser154位点特异磷酸化抗体、λPP磷酸酶处理、RNA干扰、磷酸化Kr-h1量化分析等,确认Ser154是Kr-h1的磷酸化位点。分别在飞蝗若虫和成虫体内注射PLC抑制剂U73122、PKC抑制剂NPC、PKC-α双链RNA,再通过Western blot和免疫组化检测,明确了PKC-α是触发Kr-h1磷酸化的蛋白激酶。Western blot和免疫组化分析正常发育以及JH剥夺和诱导条件下Kr-h1磷酸化的动态变化的实验结果表明,Kr-h1磷酸化修饰依赖JH。双荧光素酶报告实验显示:在飞蝗若虫期,磷酸化的Kr-h1对成虫特异基因E93表达的抑制能力更强;而在飞蝗成虫期,磷酸化的Kr-h1对生殖相关基因RL36表达的激活能力更强。同时发现,磷酸化Kr-h1对E93转录的较强抑制能力在黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)、赤拟谷盗(Tribolium castaneum)和家蚕(Bombyx mori)的幼虫期保守存在。本论文的研究结果表明,JH通过蛋白激酶PKC-α诱导Kr-h1在Ser154位点发生磷酸化,进而提升对靶基因的转录调控能力,发挥维持若虫状态和促进成虫生殖的作用。这是首次阐述Kr-h1的磷酸化机制和功能,丰富了对JH非基因组信号通路的了解。
Abstract
bao you ji su (juvenile hormone,JH)shi yi chong you kun chong yan ce ti ge cheng de bei ban tie lei ji su ,kong zhi kun chong fa yo 、bian tai he sheng shi 。jin guan JHhe shou ti Methoprene-tolerant(Met)de jian ding he jie xi jia kuai le JHfen zi zuo yong ji zhi de tan suo ,ran er dui JHxin hao tong lu de zuo yong ji li hai you dai shen ru yan jiu 。fei huang (Locusta migratoria)shi shi jie xing de chong yao nong ye hai chong ,you hen jiang de fan shi neng li 。JHdiao kong fei huang cheng chong yu hua hou di yi ge cu xing xian zhou ji nei de luan huang fa sheng 、luan chao fa yo yi ji luan cheng shou 。yin ci ,fei huang shi yan jiu JHxin hao tong lu fen zi ji zhi de li xiang mo xing 。Krüppel homolog 1(Kr-h1)shi JHde zao ji xiang ying ji yin ,zai JHyi zhi you chong huo re chong bian tai ji cu jin cheng chong sheng shi zhong fa hui guan jian zuo yong 。Kr-h1zhuai lu shou JHshou ti fu ge ti (Met/Tai)ji huo ,Kr-h1ye zhi jie diao kong ba biao ji yin de zhuai lu 。ke ti zu qian ji yan jiu fa xian ,JHyou dao Kr-h1de lin suan hua ,dan chu fa ji lin suan hua de xin hao tong lu ji ji zai ji yin zhuai lu diao kong zhong de zuo yong you dai chan ming 。ben lun wen yan jiu yi fei huang wei shi yan mo shi ,li yong xi bao sheng wu xue 、fen zi sheng wu xue he wei chuan xue deng fang fa ,tan jiu Kr-h1de lin suan hua xiu shi ji ji sheng wu xue gong neng 。chong dian yan jiu nei rong you san ge :(1)que ding Kr-h1lin suan hua wei dian ,jian ding chu fa Kr-h1lin suan hua de dan bai ji mei ;(2)fen xi zheng chang fa yo yi ji JHbao duo he you dao tiao jian xia Kr-h1lin suan hua de dong tai bian hua ,ming que Kr-h1lin suan hua xiu shi dui JHde yi lai ,jian ding JHyou dao Kr-h1lin suan hua de xin hao zhuai dao tu jing ;(3)jie xi Kr-h1lin suan hua dui ba ji yin zhuai lu de diao kong neng li ,chan ming Kr-h1lin suan hua zai kun chong bian tai he sheng shi zhong de gong neng 。tong guo gou jian tu bian zai ti ,li yong Western blothe IPshi yan shai shua dao Kr-h1ke neng de lin suan hua wei dian Ser154。tong guo zhi bei Ser154wei dian te yi lin suan hua kang ti 、λPPlin suan mei chu li 、RNAgan rao 、lin suan hua Kr-h1liang hua fen xi deng ,que ren Ser154shi Kr-h1de lin suan hua wei dian 。fen bie zai fei huang re chong he cheng chong ti nei zhu she PLCyi zhi ji U73122、PKCyi zhi ji NPC、PKC-αshuang lian RNA,zai tong guo Western blothe mian yi zu hua jian ce ,ming que le PKC-αshi chu fa Kr-h1lin suan hua de dan bai ji mei 。Western blothe mian yi zu hua fen xi zheng chang fa yo yi ji JHbao duo he you dao tiao jian xia Kr-h1lin suan hua de dong tai bian hua de shi yan jie guo biao ming ,Kr-h1lin suan hua xiu shi yi lai JH。shuang ying guang su mei bao gao shi yan xian shi :zai fei huang re chong ji ,lin suan hua de Kr-h1dui cheng chong te yi ji yin E93biao da de yi zhi neng li geng jiang ;er zai fei huang cheng chong ji ,lin suan hua de Kr-h1dui sheng shi xiang guan ji yin RL36biao da de ji huo neng li geng jiang 。tong shi fa xian ,lin suan hua Kr-h1dui E93zhuai lu de jiao jiang yi zhi neng li zai hei fu guo ying (Drosophila melanogaster)、chi ni gu dao (Tribolium castaneum)he jia can (Bombyx mori)de you chong ji bao shou cun zai 。ben lun wen de yan jiu jie guo biao ming ,JHtong guo dan bai ji mei PKC-αyou dao Kr-h1zai Ser154wei dian fa sheng lin suan hua ,jin er di sheng dui ba ji yin de zhuai lu diao kong neng li ,fa hui wei chi re chong zhuang tai he cu jin cheng chong sheng shi de zuo yong 。zhe shi shou ci chan shu Kr-h1de lin suan hua ji zhi he gong neng ,feng fu le dui JHfei ji yin zu xin hao tong lu de le jie 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自河南大学的李慧慧，发表于刊物河南大学2019-09-20论文，是一篇关于磷酸化论文,保幼激素论文,蛋白激酶论文,转录调控论文,昆虫变态和生殖论文,河南大学2019-09-20论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自河南大学2019-09-20论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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