濒危植物延龄草（Trillium tschonoskii）的遗传多样性研究

论文题目: 濒危植物延龄草（Trillium tschonoskii）的遗传多样性研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 植物学

作者: 李群

导师: 陈放,王丽

关键词: 延龄草,高效液相色谱,薯蓣皂甙元,土壤分析,离体培养

文献来源: 四川大学

发表年度: 2005

论文摘要: 延龄草(Trillium tschonoskii),俗称为“头顶一颗珠”,为百合科延龄草属的多年生草本植物,主要分布在东亚及北美。在中国,主要分布在四川西南部海拔1500到3000米的地方,云南西北、浙江西北、福建北部及甘肃东南部等地区也有分布。其根茎含薯蓣皂甙、叶片含黄酮类化合物等有效成份,具杀菌、止血、解毒等功效,主治头晕目眩、高血压、神经衰弱症,是传统名贵中药之一。延龄草具有典型“北极第三纪地理植物区系”植物的特征,在植物系统与进化研究中占有重要地位。近年来由于森林砍伐过度,人为活动加剧,破坏了林下生长环境,使其分布范围日趋缩小,加上根茎入药,挖掘过量和种子休眠期长、发芽率低等生物学特性,致使种群数量逐渐减少,已被国家列为三级保护植物。因此很有必要进行延龄草保护遗传学研究,探讨它的濒危机制。在濒危物种中保护遗传学的首要目标是评价遗传多样性水平和分布。 有关延龄草遗传多样性的研究,先前的工作主要集中在细胞学方面。本研究从DNA水平上,采用ISSR和AFLP两种分子标记,对延龄草居群的遗传多样性和遗传结构进行了分析,目的在于了解延龄草居群的遗传学状况,分析其濒危的机制,为其保护措施的制定提供科学的理论根据。为了挽救延龄草资源,还进行了离体培养的探讨。对不同产地延龄草的薯蓣皂甙元含量及相关的土壤

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第一章 延龄草居群遗传多样性的ISSR分析

摘要

引言

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.2 试验方法

1.2.1 延龄草总DNA的提取方法

1.2.1.1 SDS法

1.2.1.2 CTAB法

1.2.1.3 改良CTAB法

1.2.2 延龄草总DNA的提取方法比较

1.2.2.1 延龄草DNA的紫外吸收检测

1.2.2.2 延龄草DNA限制内切核酸酶酶切

1.2.2.3 RAPD-PCR扩增

1.2.3 ISSR扩增

1.2.4 ISSR扩增产物检测

1.2.5 数据的统计分析

2 结果与分析

2.1 DNA提取方法比较

2.2 ISSR遗传多样性分析

2.3 居群遗传结构分析

2.4 延龄草居群间的遗传距离和聚类分析

2.5 Mantel相关性检测

3 讨论

3.1 延龄草DNA提取

3.2 ISSR实验的稳定性

3.3 延龄草的遗传多样性

3.4 延龄草居群的遗传结构

3.5 延龄草遗传多样性的保护策略

参考文献

第二章 延龄草居群遗传多样性的AFLP分析

摘要

引言

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.2 试验方法

1.2.1 延龄草总DNA提取

1.2.2 AFLP扩增程序

1.2.3 AFLP扩增步骤中实验条件的优化

1.2.3.1 双酶切

1.2.3.2 连接

1.2.3.3 预扩增

1.2.3.4 选择性扩增实验条件的优化

1.2.3.5 选择性扩增

1.2.3.6 扩增产物的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析

1.2.3.7 数据分析

2 结果与分析

2.1 AFLP实验条件优化

2.1.1 模板浓度的影响

2.1.2 酶切

2.1.3 预扩增

2.1.4 选择性扩增实验体系的确立

2.1.4.1 选择性扩增条件的筛选

2.1.4.2 选择性扩增引物的筛选

2.2 AFLP遗传多样性分析

2.3 居群遗传结构的分析

2.4 延龄草居群间的遗传距离和聚类分析

3 讨论

3.1 AFLP实验条件的优化

3.2 延龄草的遗传多样性

3.3 延龄草居群的遗传结构

3.4 ISSR与AFLP标记的比较

参考文献

第三章 延龄草离体培养体系的初步建立

摘要

引言

1 材料与方法

1.1 供试材料

1.2 技术路线

1.3 试验方法

1.3.1 外植体的处理及接种

1.3.2 培养基

1.3.3 培养及观察

1.3.4 继代培养

1.3.5 生根培养

2 结果与分析

2.1 启动培养

2.1.1 不同外植体在不同培养基上的反应

2.1.2 不同取材时期外植体污染及启动情况

2.1.3 芽外植体在不同培养基配方中的反应

2.1.4 培养条件对外植体的影响

2.2 继代培养

2.3 生根培养

3 讨论

3.1 延龄草的离体培养

3.2 延龄草离体培养中存在的问题

参考文献

第四章 土壤环境条件对延龄草根茎中薯蓣皂甙元含量的影响

摘要

引言

1 材料与仪器

1.1 实验材料

1.2 仪器与试剂

2 试验方法

2.1 薯蓣皂甙元的提取

2.2 薯蓣皂甙元的定性鉴定

2.3 溶液配制

2.3.1 对照品溶液配制

2.3.2 供试品溶液配制

2.4 薯蓣皂甙元色谱峰纯度的鉴定

2.5 薯蓣皂甙元含量的测定

2.5.1 标准曲线的制作

2.5.2 进样精密度试验

2.5.3 溶液稳定性试验

2.5.4 重复性试验

2.5.5 回收率试验

2.5.6 样品中薯蓣皂甙元含量的测定

2.6 土壤分析

2.6.1 土壤水分的测定

2.6.2 土壤容重的测定

2.6.3 土壤PH值的测定

2.6.4 土壤营养元素的测定

3 结果与分析

3.1 薯蓣皂甙元的定性鉴定

3.2 薯蓣皂甙元色谱峰纯度的鉴定

3.3 薯蓣皂甙元标准曲线、进样精密度、溶液稳定性、重复性及回收率试验

3.4 不同地区延龄草样品薯蓣皂甙元的含量

3.5 影响延龄草薯蓣皂甙元含量的土壤因素

4 讨论

4.1 延龄草薯蓣皂甙元的提取及测定

4.2 延龄草薯蓣皂甙元含量与土壤养分元素之间的关系

参考文献

结论

文献综述

第五章 植物遗传多样性及其保护研究进展

1 遗传多样性研究

1.1 遗传多样性研究的理论和实际意义

1.2 遗传多样性与遗传结构

1.2.1 遗传多样性的概念

1.2.2 居群的遗传结构

1.3 影响物种遗传变异和遗传结构的因素

1.3.1 影响物种遗传变异大小的因素

1.3.2 影响物种遗传结构的因素

2 遗传多样性保护

2.1 保护遗传学研究概况

2.2 保护遗传学在濒危植物研究中的应用

2.2.1 濒危物种的遗传多样性

2.2.2 确定保护单元

2.2.3 探讨濒危植物濒危的原因，合理保护物种

2.2.4 制定保护策略

2.3 遗传多样性研究方法及其进展

2.3.1 形态学水平

2.3.2 染色体水平

2.3.3 蛋白质标记

2.3.4 DNA标记

2.3.4.1 限制性片段长度多态性

2.3.4.2 随机扩增多态性DNA

2.3.4.3 扩增片段长度多态性

2.3.4.4 微卫星

2.3.4.5 微卫星间隔

2.3.5 DNA序列分析

3 药用植物组织培养研究进展

3.1 药用植物组织培养研究现状及进展

3.2 药用植物组织培养存在的问题

4 延龄草植物的研究

4.1 形态特征及地理分布

4.2 研究现状及进展

参考文献

致谢

发布时间: 2005-10-08

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