应用生物测定法研究重组水蛭素在家兔体内的药物代谢动力学

论文摘要

目的:建立一种生物测定方法以检测家兔血浆中重组水蛭素（recombinant hirudin,rH）,并应用该法研究正常及急性重度肾衰家兔iv rH 后的药物代谢动力学。为 rH 的新药开发及临床合理用药提供实验依据。 方法: 1 家兔血浆 rH 浓度的测定 借助 rH 的抗凝血酶活性测定血浆中 rH 浓度,选择凝血酶时间（thrombin time,TT）为其活性指标,通过随行标准曲线计算 rH 血浆浓度。 2 影响 TT 测定的有关因素 固定其他条件不变,配置不同浓度的凝血酶溶液,测定 TT,比较在不同酶浓度下,TT 的改变。固定其他条件不变,改变 Tris-HCL 缓冲液的 pH,测定 TT,探讨缓冲液 pH 对 TT 的影响,以便选择最佳 pH的缓冲液。 3 方法学的验证 精密度、方法回收率、最低定量限和线性范围,按常规方法进行测定。稀释回收率:配制一系列已知高浓度 rH 标准血浆样品（浓度记为 C0）,用空白兔血浆经过不同倍数的稀释（倍数记为 N）,使稀释后浓度在线性范围以内,再用上述测定方法测定得稀释浓度,记为 Cd。·2·稀释回收率（%）=Cd ×N / C0×100。稳定性考察:配制浓度为 0.27mg/kg的血浆 rH 标准溶液,即刻测其浓度,其余于–20℃保存,分别于第 2、第 4 和第 7 天测定其浓度,以考察其稳定性。4 药代动力学研究取 25 只家兔随机均分为 5 组,即 iv 高剂量组（4.0mg/kg,iv）、中剂量组（2.0mg/kg,iv）和低剂量组（1.0mg/kg,iv）以及 rH 皮下注射组（2.0mg/kg,sc）与急性重度肾衰组（2.0mg/kg, iv）。高、中、低剂量组于给药后 5、10、20、30、40、60、90、120、180、240min 分别经耳缘静脉取血 0.45ml,抗凝、离心得血浆,于–20℃保存待测。皮下给药组 sc rH 2.0mg/kg 后 15、30、60、90、120、150、180、210、240、300min 经耳缘静脉分别取血,同上离心得血浆,冷冻待测。急性重度肾衰组造模后,iv rH 2.0mg/kg,同上离心得血浆。将所有血浆按上述方法测定 rH 血浆浓度。结果经 3p87 程序处理拟合房室模型,并计算出药代动力学参数。结果:1 TT 测定的影响因素随凝血酶浓度的增加,TT 降低并显示双相改变:低浓度阶段（1.255.0u/ml）,TT 随凝血酶浓度增加急剧下降;高浓度阶段（10.040.0 u/ml）,TT 随凝血酶浓度增加缓慢下降,并趋近于一个恒定值（3.6sec）。当凝血酶浓度为 5u/ml 时,其 rH 浓度的线性范围及相关系数均优于凝血酶浓度为 2.5u/ml,故选用凝血酶浓度为 5u/ml。当缓冲液 pH 从 7.0 升至 7.4 时,TT 明显延长,当 pH 从 7.0 升至 7.4 时,TT 变化不大。2 方法学的验证对数 TT 延长百分率与浓度呈线性相关,r=0.980.99,线性范围为0.120.60μg/ml,最低定量限为 0.12μg/ml。日内精密度 5.8%9.1%,日间精密度 9.2%11.5%。方法回收率 97.599.2%;在 2100 倍的稀释范围内,稀释回收率为 93.694.8%。血浆样品在-20℃冰冻保存,在 1 周内稳定。

论文目录

• 一、论文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料和方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 正文
• （二） 参考文献
• 三、致谢